买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：山东丽山生物科技有限公司

摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种无血清培养驯化贴壁293T细胞的方法及其应用。包括以下步骤：将DMEM完全培养基培养的293T细胞接种至混合培养基中进行培养，得到混合培养基培养的293T细胞；其中所述混合培养基的组成为：含血清培养基和无血清培养基，所述含血清培养基和无血清培养基的体积比为4:1~1:3；将所述混合培养基培养的293T细胞接种至无血清培养基中进行培养，得到LS293T贴壁细胞，其中所述无血清培养基中包含贴附因子；所述贴附因子为重组人纤连蛋白。本发明得到的LS293T贴壁细胞在细胞活性、倍增时间方面与驯化前无差异。在慢病毒包装应用中，LS293T贴壁细胞兼具无血清培养和纯化压力小的优势。

主权项：1.一种无血清培养驯化贴壁293T细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、培养基配制1配制含血清培养基：所述含血清培养基为DMEM完全培养基，组成为DMEM高糖培养基和胎牛血清，其中DMEM高糖培养基和胎牛血清的体积比为40～50：5；2配制无血清培养基：所述无血清培养基为OptiPROSFM完全培养基，组成为OptiPROSFM培养基和谷丙氨酸二肽，其中OptiPROSFM培养基和谷丙氨酸二肽的体积比为48～50：1，所述谷丙氨酸二肽的终浓度为4mmolL；S2、将DMEM完全培养基培养的293T细胞接种至第一培养基中进行培养，得到第一培养基培养的293T细胞，其中所述第一培养基的组成为：含血清培养基和无血清培养基，所述含血清培养基和无血清培养基的体积比为4:1；S3、将所述第一培养基培养的293T细胞接种至第二培养基中进行培养，得到第二培养基培养的293T细胞，其中所述第二培养基的组成为：含血清培养基和无血清培养基，所述含血清培养基和无血清培养基的体积比为2:1；S4、将所述第二培养基培养的293T细胞接种至第三培养基中进行培养，得到第三培养基培养的293T细胞，其中所述第三培养基的组成为：含血清培养基和无血清培养基，所述含血清培养基和无血清培养基的体积比为1:1；S5、将所述第三培养基培养的293T细胞接种至第四培养基中进行培养，得到第四培养基培养的293T细胞，其中所述第四培养基的组成为：含血清培养基和无血清培养基，所述含血清培养基和无血清培养基的体积比为1:3；S6、将所述第四培养基培养的293T细胞接种至第五培养基中进行培养，得到LS293T贴壁细胞，其中所述第五培养基的组成为：无血清培养基和贴附因子；其中所述贴附因子为重组人纤连蛋白。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山东丽山生物科技有限公司 一种无血清培养驯化贴壁293T细胞的方法及其应用