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申请/专利权人：中国人民武装警察部队特色医学中心

摘要：本发明属于生物医疗美容产品技术领域，具体涉及一种用于损伤修复的脐带间充质干细胞上清液、其产品及制法。所述的用于损伤修复的脐带间充质干细胞上清液的制备方法包括：1原代培养；2传代培养；3饥饿培养。本发明方法制备的上清液中含有多达几百种细胞因子以及外泌体在内的丰富的细胞活性物质，具有突出地平衡调节细胞生长活化作用，用于损伤修复效果显著，且不含外来培养基和细胞组分，皮肤使用安全性高，产品批次之间质量稳定，并且可进一步制成活性物质保存完好的冻干粉形式长期保存。

主权项：1.一种用于损伤修复的脐带间充质干细胞上清液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1原代培养：从脐带中分离华通氏胶组织并剪成组织块，铺至培养瓶中，然后加入培养基进行贴壁培养至脐带间充质干细胞长满50-60％培养瓶底面积，得到P0代脐带间充质干细胞；2传代培养：a弃去培养基，然后依次加入洗涤液洗涤、加入消化液消化、加入终止消化液终止消化、离心收集细胞沉淀，以及用培养基将细胞沉淀重悬后，接种至新的培养瓶中进行传代培养；b待脐带间充质干细胞长满70-80％培养瓶底面积时重复步骤a，经连续5次传代培养，得到P5代脐带间充质干细胞；3饥饿培养：待P5代脐带间充质干细胞长满培养瓶70-80％面积时，弃去培养基进行饥饿培养，所得培养液离心去除细胞沉淀后，即得到所述用于损伤修复的脐带间充质干细胞上清液；所述原代培养和传代培养中采用的培养基均为无血清培养基，所述无血清培养基包括：基础培养基BiologicalIndustriesMSCXFBasalMedium、重组因子MSCXFSuppl.Mix和血清替代物HELIOSUltraGRO-PUREGI，所述的基础培养基、重组因子和血清替代物的体积比为500:3:10；步骤1中，将组织块均匀铺到T225通气细胞培养瓶中，每瓶加入10mL培养基，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养，每2-3天补加培养基3-4mL；步骤2中，洗涤液为HBSS，洗涤次数为2次；消化液为重组胰酶BiologicalIndustriesRecombinantTrypsinEDTASolution，室温消化2min至细胞变圆；终止消化液为含1％人血白蛋白的复方电解质溶液；所述接种密度为5000个cm2，接种后置于37℃、5％CO2培养箱中传代培养；步骤3中，弃去培养基后，用PBS缓冲液清洗2-3次，然后每培养瓶加入15mLHBSS，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养24h。

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