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申请/专利权人：深圳市先康达生命科学有限公司
摘要：本发明公开了一种提高CAR‑T细胞CAR表达的培养方法，包括步骤：磁珠与T细胞孵育培养；孵育结束后静置去上清，获得磁珠与T细胞的复合物；培养液重悬复合物后加入24孔板培养；补充添加磁珠及糖肽，继续培养；加入慢病毒转导；转导结束离心，去上清，添加扩增培养液，获得高CAR表达的提高CAR‑T细胞。该培养方法中，补充添加磁珠与糖肽以进一步激活T细胞；使得CAR‑T细胞经扩增培养后，在7天内可以提高CAR‑T细胞的CAR表达率高达39.38％；同时，CAR‑T细胞的细胞亚型的CD4+比例更高、CD8+比例更低，这样通过调节T细胞亚群的CD4+与CD8+的比例，可以使CAR‑T细胞中的CD4CD8的比例由0.33上升到1.11。
主权项：1.一种提高CAR-T细胞CAR表达的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：将磁珠与T细胞加入盛有细胞基础培养液的离心管中进行孵育30min；孵育结束后，加入2mlDPBS洗涤T细胞和磁珠，并将离心管置于磁力架上静置2～30min，弃上清后获得磁珠与T细胞的复合物；往离心管中加入T细胞基础培养液重悬磁珠与T细胞的复合物，将重悬后的复合物加入24孔板中并置于37℃、5％CO2培养箱中，静置培养24h；往24孔板中加入糖肽溶液及补充添加磁珠后，继续培养24h；培养结束后，按照MOI＝1，往24孔板加入慢病毒后转导6h，得到T细胞液；转导结束后T细胞液转移至离心管，500g离心5min，弃上清，加入细胞扩增培养液重悬，并置于37℃，5％CO2培养箱培养4天；自第5天开始，转移至培养瓶中培养8天，培养结束获得高CAR表达的CAR-T细胞。
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权利要求：
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