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申请/专利权人：奥斯瓦尔多克鲁兹基金会;米纳斯吉拉斯联合大学

摘要：本技术公开了使用SEQIDNo.2的核苷酸序列来产生SEQIDNo.1的嵌合蛋白质的方法。本技术还也公开了经由SEQIDNo.1定义的嵌合蛋白质，用于产生其的SEQIDNo.2的基因，包含此类蛋白质的免疫原性组合物，和其在制备用于预防和防止COVID‑19感染以及中等和严重形式的COVID‑19的疫苗中的用途。本技术被包括在人类健康的领域中，尤其是在针对SARS‑CoV2感染的预防措施的领域中。本技术涉及包含嵌合蛋白质的疫苗组合物的产生，其通过刺激免疫系统来防止高病毒载量以及该疾病的中等和严重临床形式。

主权项：1.产生嵌合蛋白质的方法，其特征在于，所述方法包括下列步骤：a.将编码经由SEQIDNo.1定义的蛋白质的经由SEQIDNo.2定义的DNA克隆到表达载体中；b.用在“a”中获得的构建物转化大肠杆菌细菌，并且在合适的培养基中在36.5至37.5℃的温度下在以180至200rpm的搅动下培养3至4小时；c.通过向所述培养基添加IPTG来诱导经由SEQIDNo.1定义的蛋白质的表达，并且在36.5至37.5℃下在搅动下维持培养15小时至24小时的时间段；d.使用包含具有7至8的pH的缓冲试剂、蛋白酶抑制剂混合物和还原剂的裂解缓冲液，通过经由保持15,000至20,000psi（103.42至137.90MPa）的压力使样品通过匀浆设备5至20分钟，裂解来自在“c”中获得的培养物的细胞沉淀物；e.使在“d”中获得的裂解物经历以35,000g至45,000g离心20至40分钟；f.使用包含0.5至1M尿素，pH7至8的缓冲液，通过重悬浮和以35,000g至45,000g离心20至40分钟，对于在“e”中获得的不溶性级分施行2个洗涤步骤；g.通过在4至6℃下搅动大约18至24小时，在包含6至8M尿素和蛋白酶抑制剂混合物的缓冲液中施行包含在“f”中获得的经洗涤的不溶性级分的沉淀物的重悬浮步骤；h.使在“g”中获得的重悬浮液经历以35,000g至45,000g离心20至40分钟；i.使在“h”中获得的经溶解的样品经历两个离子交换色谱法步骤，其中首先在阴离子柱中，然后将在阴离子柱中未结合的材料施加至阳离子柱，在pH7至8下，在6至8M尿素存在下；j.使在“i”中获得的具有最高浓度的SpiN蛋白的级分经历脱盐色谱法，以去除尿素并且更换为包含50至150mM尿素，pH10.5至11.5的缓冲液。

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百度查询： 奥斯瓦尔多克鲁兹基金会 米纳斯吉拉斯联合大学 嵌合蛋白质产生方法、嵌合蛋白质、基因、免疫原性组合物和用途