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申请/专利权人:西北工业大学深圳研究院;西北工业大学
摘要:本发明一种基于CRISPR与滚环扩增的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法,属于基因检测技术领域;检测方法步骤为:在成环反应体系中合成环状DNA模板;将所述环状DNA模板与DNA聚合酶、dNTPs、重组白蛋白、引物和聚合酶反应缓冲液一起孵育,然后通过热处理终止反应,获得RCA扩增产物;将预组装的Cas12a‑crRNA与RCA扩增产物、FRET荧光探针加入缓冲液中孵育,产生可被检测到的比率荧光信号变化,得到待测样品溶液;对荧光信号进行测量。本发明具有耗时短,在复杂食品基质中灵敏检测等优势。
主权项:1.一种基于CRISPR与滚环扩增的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法,其特征在于具体步骤如下:在成环反应体系中合成环状DNA模板;所述成环反应体系包括挂锁探针、靶标基因、1×SplintRBuffer、SplintR连接酶和水,其中,挂锁探针的序列为:P-TGATCCCAATTATACCACGTTTGGGCGTGTTAACCCACGCCGAATAATGAATGACGCTA;将所述环状DNA模板与DNA聚合酶、dNTPs、重组白蛋白、引物和聚合酶反应缓冲液一起孵育,然后通过热处理终止反应,获得RCA扩增产物;所述引物的序列为:TTAACACGCCCAAACGTGGTA;将预组装的Cas12a-crRNA与RCA扩增产物、FRET荧光探针加入缓冲液中孵育,产生可被检测到的比率荧光信号变化,得到待测样品溶液;所述crRNA的序列为UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUGGCGUGUUAACCCACGCCGAAU;对荧光信号进行测量。
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