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申请/专利权人:贵州省烟草公司六盘水市公司
摘要:本发明公开了一种siRNA递送系统及其制备方法与应用,首次以CPPs修饰的TDN为骨架,以PDA修饰的MSN为载体,构建siRNA递送系统TDN‑siRNA@CPP@PDA‑MSN,高效提高siRNA利用率,实现植物病毒病的防治。该递送系统中PDA‑MSN可显著减少siRNA在环境中的降解,CPPs的包覆使siRNA自发且高效的渗透细胞壁进入细胞中,提高siRNA在细胞间的递送和运输,诱导靶基因HSP70表达下调,并减缓TMV对烟草的侵染。该系统在无农杆菌介导条件下,就可以诱导烟草靶基因HSP70发生有效基因沉默,是传统基因沉默方法的创新性替代方法,扩大了RNAi在植物病害防治中的应用。
主权项:1.一种siRNA递送系统的制备方法,其特征在于,所述方法包括:将A-15链、B链、C链和D链的核酸配制成反应体系进行第一反应,获得四面体DNA纳米颗粒TDN;所述A-15链、B链、C链和D链的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4所示;其中,所述A-15链的5’端含有如SEQIDNO.5所示的接头序列;将待递送的siRNA的正义链和其反义链核酸配制成反应体系进行第二反应,获得siRNA;其中,所述待递送的siRNA的正义链的5’端加有如SEQIDNO.5所示的接头序列;将所述四面体DNA纳米颗粒TDN和所述siRNA与PBS混合后进行第三反应使两者的反向互补接头序列结合,获得TDN-siRNA溶液;将氨基酸序列如SEQIDNO.7所示的CPP添加到所述TDN-siRNA溶液中进行第四反应,获得核酸细胞穿梭肽复合物TDN-siRNA@CPP;将二氧化硅纳米颗粒分散于缓冲液中,加入多巴胺盐酸盐进行第五反应,后离心获得聚多巴胺包覆二氧化硅纳米颗粒PDA-MSNs;将含有所述TDN-siRNA@CPP的超纯水分散液与含有所述PDA-MSN的超纯水分散液孵育,获得siRNA递送系统TDN-siRNA@CPP@PDA-MSN复合物。
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