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一种基于特征提取和图像处理的细胞培养生长检测方法 

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申请/专利权人:湖南开启时代科技股份有限公司;湖南开启时代生物科技有限责任公司

摘要:本发明公开了一种基于特征提取和图像处理的细胞培养生长检测方法,包括以下步骤:计算细胞培养灰底图的平均灰度;进行阈值分割,得到二值图;二值图灰度化,计算灰度图非黑色区域的平均灰度;计算细胞培养数据的左半部分的平均灰度与右半部分的平均灰度;对灰底图做阈值处理,再处理得到新的二值图;采用轮廓法计算得到新的二值图连通域的个数;判断细胞是否污染,若污染,则细胞不可用,细胞培养终止,若没有污染,则判断细胞是否贴壁,若不贴壁,则代表细胞活性不可用,细胞培养终止,若贴壁,根据面积比值的结果判断细胞活性。本发明结合特征提取和图像处理来判断细胞是否污染、判断细胞是否贴壁以及计算面积比值,从来检测细胞活性。

主权项:1.一种基于特征提取和图像处理的细胞培养生长检测方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一:拍摄细胞培养数据的图片并转为灰底图src,计算灰底图中细胞培养数据结构清晰度NRSS,得到无参考图像清晰度的评价标准dPollute;步骤二:计算灰底图的平均灰度meangray1;步骤三:通过观察,对细胞培养数据不同灰度的情况进行阈值分割,得到二值图th,计算二值图th的白色占整张图的面积比areaRatio;步骤四:对二值图th灰度化,得到灰度图grayth,即感兴趣区域的灰度化,并计算灰度图grayth非黑色区域的平均灰度meangray2;根据meangray2与meangray1得到灰度差值meangray;步骤五:通过对细胞培养数据的观察发现细胞培养数据存在反光,因此分别计算细胞培养数据的左半部分的平均灰度partgray1与右半部分的平均灰度partgray2,通过partgray1和partgray2得到平均灰度差值partgray;步骤六:根据meangray1对灰底图src做阈值处理得到二值图thimg;对二值图thimg进行膨胀、腐蚀、去噪操作得到新的thimg;对新的thimg进行面积比计算得到面积值areaRatio1,采用轮廓法计算得到新的thimg连通域的个数num;步骤七:根据以上得到的dPollute、meangray1、areaRatio判断细胞是否污染,若污染,则细胞不可用,细胞培养终止,若没有污染,则进入步骤八;所述步骤七中,判断细胞是否污染的公式为: th1为灰度值,th6、th7、th9分别为通过NRSS梯度结构相似度方法得到的梯度结构相似值,th6取值为0.9~0.95;th7取值为0.9~0.95;th9取值为0.92~0.95;th8为感兴趣区域的像素和即面积,其取值为0.001~0.01;p为0表示未污染,1表示细胞受到污染;步骤八:根据以上得到的dPollute、meangray1、meangray2、meangray、areaRatio判断细胞是否贴壁,若不贴壁,则代表细胞活性不可用,细胞培养终止,若贴壁,则进入步骤九;所述步骤八中,判断细胞是否贴壁的公式为: th10、th11为通过NRSS梯度结构相似度方法得到的梯度结构相似值,th10取值为0.005~0.015,th11取值为0.8~0.9;p1为0表示未贴壁,1表示细胞贴壁;步骤九:根据以上得到的areaRatio1、num、partgray得到细胞占整个数据的面积比值areaper,根据面积比值areaper的结果判断细胞活性;所述步骤九中,根据面积比值areaper的结果判断细胞活性的方式为: th12为图像连通域的个数,th12值的范围为200~400;th13为partgray1与partgray2的差值,其范围为10~30;a,b,c则是对百分比的改进数值,a=0.1~0.5,b=0.1~0.3,c=0.05~0.15;由于不同时间培养下的细胞受到杂质跟细胞灰度的影响不同,此公式根据数据研究以及经验得到,细胞百分比的计算是为了了解细胞是否停止生长,细胞是否属于正常生长的一个过程。

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