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申请/专利权人：黄河水利职业技术学院

摘要：本发明公开了一种测定可食用真菌中总磷含量的方法，涉及分析化学技术领域。本发明与之前的磷含量测定方法相比，解决了现有方法使用仪器复杂且准确率较低，且可食用真菌中的有机磷含量较低，内部物质成分丰富、基质复杂，干扰组分多，导致对可食用真菌中的有机磷含量检测较为困难的问题；将超声波提取与固相萃取梯度洗脱技术与磷钼蓝分光光度法进行结合，以测定可食用真菌中的磷含量，可充分利用磷钼蓝在酸性条件下与磷形成深蓝色络合物的特性，实现对磷含量的准确测定。不仅可以提高磷含量的测定灵敏度和选择性，还可以简化样品处理的步骤，缩短分析时间，提高对于可食用真菌样品前处理的效率和准确性，并且适用于不同类型的可食用真菌。

主权项：1.一种测定可食用真菌中总磷含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：磷酸盐标准溶液制备：称取1.5～2.5g磷酸二氢钾在100～110℃干燥器中干燥2～3h并冷却，取0.2～0.5g干燥后的磷酸二氢钾溶于去离子水中，移入1000mL的容量瓶中，加质量分数为50％的硫酸3～8mL，再加入去离子水稀释至标线，用吸量管吸取稀释的溶液5～10mL于250mL容量瓶中，用水稀释至标线，此时制备获得的磷酸盐标准溶液中磷含量为2μgmL；S2：制备钼酸铵溶液：将5～15％酒石酸钾钠、1～5％尿素以及5～15％钼酸铵按照1:1:1的比例进行均匀混合；S3：制作磷标准曲线：用8支50mL的比色管分别吸取磷酸盐标准使用液0.00mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、8.00mL、10.00mL、20.00mL、30.00mL，并加水至50mL；向比色管中加入1～2mL还原剂，混匀30～60s后，加2～4mL的钼酸铵溶液，充分混匀，并放置15～30min；以不加磷酸盐的试剂空白溶液作为参比液，用1cm比色皿在700nm波长处测定每个标准样的吸光度值；以吸光度值为纵坐标，以标准样品质量为横坐标，绘制标准曲线并计算获得线性回归方程；S4：样品处理：取将待测真菌样品洗净、自然风干后，在瓷研钵中进行研磨，过100目筛，置于干燥器中储存备用；称取真菌样品3～5g置于50mL离心管中，加入2～4mL超纯水浸润10～15min，加入10～15mL含1～2％乙酸的乙腈溶液，混匀，超声提取10～20min，加入2～5g无水醋酸钠和2～5g无水MgSO4，涡旋2～4min，以9000～10000rmin离心4～5min得到提取液；制备A、B、C、D四种洗脱溶液进行梯度洗脱，收集梯度洗脱过程中流出的溶液，通过50～55℃的水浴氮吹近干，定量加入1～2mL丙酮溶解，过膜、待测；S5：含量测定：取S4中待测样品，每间隔10～15min测定一次吸光度值，确定相关度相对标准偏差，再吸取1.00mL到50mL比色管中，向比色管中加入2～3mL钼酸铵溶液，充分混匀，再加入1～2mL还原剂，混匀30～60s后，放置15～20min，分别测定其吸光度值；将吸光度值代入回归方程，计算真菌中磷的含量。

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