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申请/专利权人:南京科技职业学院
摘要:本发明提供了一种血清中氧化型白蛋白的检测方法及其试剂盒,涉及检测技术领域。检测方法包括步骤:血清与柠檬酸葡萄糖溶液混合后,制得待测液,待测液经高效液相色谱进行检测分析;检测血清中氧化型白蛋白的试剂盒,其特征在于,包括离子交换柱和流动相;流动相A的pH为4‑9。本发明解决了血清中还原型白蛋白和氧化型白蛋白分离不充分、氧化性白蛋白不稳定的问题,解决精准和稳定的分析小鼠血清中氧化型白蛋白的量及其存在比值的方法的问题。本发明选择合适的色谱柱和流动相,实现氧化型白蛋白的快速、准确检测,9min内可完成检测分析,分离度和峰容量高,重复性和连续性好。可应用于血清中氧化型白蛋白的检测中。
主权项:1.一种血清中氧化型白蛋白的检测方法,其特征在于,包括步骤:(1)血液与抗凝剂混合,分离血清;(2)血清与柠檬酸葡萄糖溶液混合后,于-90~-60℃下保存,制得待测液;(3)样品检测分析:将待测液经HPLC法进行检测分析;所述HPLC法的色谱条件为:色谱柱:ShodexAsahipakES-502N离子交换柱;流动相:流动相A为pH4-9的缓冲液,流动相B为无机盐水溶液;洗脱:梯度洗脱;所述梯度洗脱程序为:在第0min时:流动相A的体积为100%,流动相B的体积为0%,去离子水的体积为0%;在0-9min中:流动相A的体积以匀速从100%降到35%,第9min时流动相A的体积为35%;流动相B的体积以匀速从0%上升至65%,第9min时流动相B的体积为65%;去离子水的体积为0%,第9min时去离子水的体积为0%;在9-10min中,流动相A的体积为0%,流动相B的体积为0%,去离子水的体积为100%;流速:1mLmin;柱温:30-50℃;进样体积:2-4µl;检测器:紫外检测器;检测波长:280-340nm;数据采集时间:10min。
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