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申请/专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
摘要：本发明公开了一种检测禾谷镰孢菌RNA沉默抑制子的方法，属于微生物技术领域。该方法包括构建在禾谷镰孢菌内表达绿色荧光蛋白（eGFP）的重组菌株，之后向所述重组菌株中转入待鉴定的蛋白，最后转入靶向绿色荧光蛋白的RNA沉默载体，观察绿色荧光蛋白信号是否被沉默，根据结果判断所述待鉴定的蛋白是否为禾谷镰孢菌RNA沉默抑制子。本发明方法的优点在于改变了传统利用植物鉴定真菌RNA沉默抑制子，实现了在真菌细胞内鉴定真菌RNA沉默抑制子，该方法操作简单、通用性高和鉴定结果可靠。
主权项：1.一种检测禾谷镰孢菌RNA沉默抑制子的方法，其特征在于，包括以下步骤：构建在禾谷镰孢菌内表达绿色荧光蛋白的重组菌株，之后向所述重组菌株中转入待鉴定的蛋白，最后转入靶向绿色荧光蛋白的RNA沉默载体，观察绿色荧光蛋白信号是否被沉默，根据结果判断所述待鉴定的蛋白是否为禾谷镰孢菌RNA沉默抑制子；构建在禾谷镰孢菌内表达绿色荧光蛋白的重组菌株包括以下步骤：将绿色荧光蛋白的编码基因与表达载体I连接构建重组表达载体；将所述重组表达载体转入禾谷镰孢菌，经过抗性筛选，得到在禾谷镰孢菌内表达绿色荧光蛋白的重组菌株；所述表达载体I包括pCPHY1载体；所述待鉴定的蛋白的编码基因与表达载体II连接构建重组表达载体后，转入所述重组菌株；所述表达载体II包括pGTN载体；所述RNA沉默载体包括p26-D载体；所述判断的方法为：绿色荧光蛋白信号没有被沉默或沉默强度降低，则指示所述待鉴定的蛋白具有RNA沉默抑制功能，即待鉴定的蛋白为禾谷镰孢菌RNA沉默抑制子。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国农业科学院植物保护研究所 一种检测禾谷镰孢菌RNA沉默抑制子的方法
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