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申请/专利权人：日照岚山生化制品有限公司

摘要：本发明公开了一种硫酸软骨素钠中生物大分子的琼脂糖凝胶电泳检测方法，涉及琼脂糖凝胶电泳检测技术领域，本专利提供的方法，可以使用一次电泳的时间电泳两块琼脂糖凝胶板，进而后续可同时测定10批样品，一次实验的样品数显著增多进而工作效率加倍，相比于现有需要将凝胶板在10体积无水乙醇90体积缓冲溶液A的混合液和30体积无水乙醇70体积缓冲溶液A的混合液中浸泡并分别电泳三次，每次20分钟的方式，本方案采用一次电泳35‑38分钟的方式，可以达到更优技术效果的同时避免引入毒性，也降低检测过程中的能耗，效果更佳。

主权项：1.一种硫酸软骨素钠中生物大分子的琼脂糖凝胶电泳检测方法，其特征在于，包括琼脂糖凝胶、电泳槽、缓冲溶液A、缓冲溶液B、模具、滤纸以及电泳陶瓷板，检测方法包括以下步骤,S1、首先称取0.18g琼脂糖凝胶，加入14ml纯化水中，加热使琼脂糖凝胶融化在纯化水中，随即冷却至60℃度左右并加入1ml缓冲溶液A0.1molL醋酸钡缓冲液，摇匀，随即将其灌入组装好的模具中，室温下放置30min，即得8.3×7.3cm，1mm厚的琼脂糖凝胶板；S2、首先将电泳陶瓷板接入自来水冷却，随即将S1中制备完毕后的两块琼脂糖凝胶板平行放在电泳陶瓷板的中央；随即在琼脂糖凝胶板上滴加缓冲溶液A，并使其均匀覆盖凝胶板，预平衡1分钟后用滤纸吸去多余的缓冲溶液A；S3、将点样条轻轻放置在S2中处理完毕后的琼脂糖凝胶板的点样位置上，点样条上包括若干点样孔，点样孔与点样位置处于同一水平位置，随即用手轻轻按压，排除气泡；S4、用微量注射器取每个供试溶液和对照溶液硫酸软骨素钠各1μl，随即依次加入S3中点样条的若干加样孔中，随即分别将供试溶液以及对照溶液向加样孔两侧缓慢均匀涂抹。当加完最后一个溶液后，放置30分钟左右，直至溶液渗透入琼脂糖凝胶板中；S5、向电泳槽两侧的缓冲液池中各加200ml-250ml的缓冲溶液B，将滤纸剪成10cm×19cm大小，将其折叠5-10层放入缓冲液B中充分浸泡，过夜，使其完全饱和；随即将缓冲溶液B饱和的滤纸条，分别放在电泳槽正极和负极，在凝胶板的两侧平行压上被缓冲液B饱和的滤纸条，然后压上带电极丝的玻璃板，并保证正、负电极丝平行，最后盖上电泳槽的盖；S6、电泳槽中设置电流为恒流75mAgel，电泳槽中的电压数为30-70V，电泳35-38分钟；S7、将S6中处理完毕后的琼脂糖凝胶板放入染色剂中染色10分钟；S8、将S7中处理完毕后的琼脂糖凝胶板在水龙头上用流水冲洗15分钟后，再用纯化水冲洗10-15分钟。

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