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申请/专利权人：华南农业大学

摘要：本发明公开一种基于实时荧光定量PCR评估香蕉内源性BSV激活积累量的方法，属于香蕉病毒检测技术领域。通过该方法可以准确评估内源性BSV如BSOLV的激活积累量。该方法适用于生物胁迫和非生物胁迫情况下，评估B基因组香蕉中内源性BSV如BSOLV的激活积累量，为利用内源性BSV如BSOLV的激活积累量来预测香蕉线条病的发生和流行提供科学依据，以采取防控措施阻断香蕉线条病的流行。该方法的优点在于，不局限于香蕉中B基因的倍数评估内源性BSV如BSOLV的激活积累量，为准确预测内源性BSV如BSOLV激活引起的香蕉线条病的流行奠定了基础。

主权项：1.一种基于SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR评估香蕉内源性BSV激活积累量的方法，其特征在于：包括如下步骤：1提取B基因组香蕉的DNA；2以含有BSV阳性植株提取的DNA为模板，根据BSV的保守序列设计引物，经PCR扩增，获得扩增产物；根据PCR扩增产物构建质粒标准品；3以质粒标准品为模板进行PCR扩增，筛选SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR引物；以确定适宜的实时荧光定量PCR引物；4利用步骤3筛选的引物，通过对引物浓度以及退火温度进行实时荧光定量PCR筛选，以确定SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR引物浓度和退火温度；然后，以步骤2的质粒标准品为模板，利用筛选得到的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR引物、引物浓度和退火温度进行qPCR扩增，以质粒DNA拷贝数的对数值为横坐标，Ct值为纵坐标，建立标准曲线；5以B基因组香蕉的DNA为模板，利用筛选得到的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR引物、引物浓度和退火温度进行qPCR扩增，并通过步骤4建立的标准曲线计算出B基因组香蕉中的BSV拷贝数，作为BSV初始拷贝数；6一段时间后，以相同基因型的B基因组香蕉的DNA为模板，利用筛选得到的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR引物、引物浓度和退火温度进行qPCR扩增，并通过步骤4建立的标准曲线计算出相同基因型的B基因组香蕉中的BSV拷贝数，作为BSV测定拷贝数；7步骤6的BSV测定拷贝数与步骤5的BSV初始拷贝数之差，即为该段时间内B基因组香蕉中内源性BSV的激活积累量。

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