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基于双链DNA分支迁移的单链核酸荧光检测方法、系统及其应用 

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申请/专利权人:重庆医科大学附属第一医院

摘要:本发明属于核酸检测技术领域,具体公开了一种基于双链DNA分支迁移的单链核酸荧光检测方法、系统及其应用。所述方法包括:选择随机序列的单链DNA靶点L1和或微小RNA靶点let‑7a作为单链核酸检测模型;L1在聚合酶存在下通过延伸转化为Y形反应探针L1P1,触发双链DNA分支迁移DTBM反应;通过链位移扩增技术产生与let‑7a序列互补的单链DNAL2,L2在聚合酶存在下通过延伸转化为L2P2,触发DTBM反应;再进行荧光检测。本发明提供的荧光检测策略对L1和let‑7a都具有极高的检测特异性,且不需要变温步骤或复杂的样品添加,有望成为一种有前景的核酸靶点检测平台。

主权项:1.一种基于双链DNA分支迁移的单链核酸荧光检测方法,所述方法非疾病诊断和治疗目的,其特征在于,包括:选择单链核酸检测模型:选择随机序列的单链DNA靶点L1和或微小RNA靶点let-7a作为单链核酸检测模型;触发双链DNA分支迁移反应:当单链核酸检测模型为L1时,在DNA聚合酶存在下,将L1通过延伸转化为Y形反应探针L1P1,所述L1P1与另一Y形荧光探针R1S1触发可逆的双链DNA分支迁移反应;所述L1P1与R1S1之间存在互补的toehold序列,且所述R1S1带有荧光基团和淬灭基团;当单链核酸检测模型为let-7a时,通过链位移扩增技术产生与let-7a序列互补且完整保存let-7a序列信息的单链DNAL2,在DNA聚合酶存在下,将所述L2通过延伸转化为Y形反应探针L2P2,所述L2P2与另一Y形荧光探针R2S2触发可逆的双链DNA分支迁移反应;所述L2P2与R2S2之间存在互补的toehold序列,且所述R2S2带有荧光基团和淬灭基团;荧光检测:检测双链DNA分支迁移反应液的荧光信号,比较基于待测核酸序列所得的双链DNA分支迁移反应液输出的荧光信号强度F2、基于正确序列所得的双链DNA分支迁移反应液输出的荧光信号强度F1与背景信号强度F0之间的大小,确定所述待测核酸序列的碱基突变情况;所述正确序列为与所述待测核酸序列相同且不存在突变位点的核苷酸序列。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 重庆医科大学附属第一医院 基于双链DNA分支迁移的单链核酸荧光检测方法、系统及其应用

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