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申请/专利权人：西安交通大学医学院第二附属医院

摘要：本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种用于提取和纯化间充质干细胞的方法。该方法包括如下步骤：脂肪组织的采集和制备；超声波辅助消化：将制备好的脂肪组织置于含有体积百分比浓度0.05％～0.1％的胶原酶I和体积百分比浓度为0.005％～0.02％的中性蛋白酶的酶解液中，得到混合液；将混合液在36℃～38℃下进行超声波辅助消化；双重过滤系统：将消化后的混合液通过微孔滤膜和超滤系统进行初步纯化，去除大块组织碎片和血细胞，得到经双重过滤系统纯化后得到的细胞悬液；免疫磁珠负选；高效液相分离。本发明提供的用于提取和纯化间充质干细胞的方法具有高效性和创新性，确保提取的间充质干细胞符合国际细胞治疗标准，利于成果转化和临床应用。

主权项：1.一种用于提取和纯化间充质干细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤；脂肪组织的采集和制备；将制备好的脂肪组织置于含有体积百分比浓度为0.05％～0.1％的胶原酶I和体积百分比浓度为0.005％～0.02％的中性蛋白酶的酶解液中，形成混合液；将混合液在36℃～38℃下进行超声波辅助消化；超声波频率设定为39kHz～41kHz，处理时间为18分钟～22分钟，且每4.5分钟～5.5分钟混匀一次；制备好的脂肪组织的质量与酶解液的体积比为：0.9g～1.1g：10mL；双重过滤系统：将消化后的混合液通过微孔滤膜和超滤系统进行双重过滤，去除大块组织碎片和血细胞，得到初步纯化的细胞悬液；免疫磁珠负选：将经双重过滤系统纯化后得到的初步纯化的细胞悬液，与抗CD45磁珠和抗CD31磁珠在3.9℃～4.1℃下孵育25分钟～35分钟，通过免疫磁珠负选技术去除细胞悬液内的血细胞和内皮细胞，得到未结合磁珠的细胞悬液；经双重过滤系统纯化后得到的初步纯化的细胞悬液与抗CD45磁珠和抗CD31磁珠的质量比为1：20：20；高效液相分离：将未结合磁珠的细胞悬液与抗CD73抗体、抗CD90抗体和抗CD105抗体在36℃～38℃下孵育28分钟～32分钟，得到标记好的细胞悬液；将所述标记好的细胞悬液通过高效液相色谱系统进行分离，获得高纯度的间充质干细胞；未结合磁珠的细胞悬液与抗CD73抗体、抗CD90抗体和抗CD105抗体的质量比为1：100：100：100。

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