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申请/专利权人：中国农业科学院油料作物研究所

摘要：本发明涉及一种纳米酶免疫层析试纸条、制备方法及应用。它包括免疫层析试纸条、催化反应液，含有纳米酶标记的识别第一待检测物的单克隆抗体、纳米酶标记的识别第二检测物的单克隆抗体的反应试剂，所述的催化反应液为含有TMB和双氧水的PH为3‑5的缓冲溶液。可用于粮食产品中黄曲霉毒素B1和伏马毒素B1的同步检测，具有操作简单、快速、灵敏度高、检测范围可调控的特点。

主权项：1.一种基于纳米酶免疫层析试纸条同步检测黄曲霉毒素B1和伏马毒素B1的方法，其特征在于：所述的纳米酶免疫层析试纸条包括免疫层析试纸条、催化反应液和纳米酶标记的识别黄曲霉毒素B1的单克隆抗体溶液、纳米酶标记的识别伏马毒素B1的单克隆抗体溶液，其中：所述的免疫层析试纸条包括背衬底板，背衬底板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和两条检测线，所述质控线包被有羊抗鼠多克隆抗体，所述两条检测线位于质控线下方，检测线上分别包被黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物和伏马毒素B1-牛血清白蛋白偶联物，检测垫上每厘米检测线所需的黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物的包被量为0.12-0.24μg，每厘米检测线所需的伏马毒素B1-牛血清白蛋白偶联物的包被量为0.3-0.6μg，每厘米质控线所需的羊抗鼠多克隆抗体的包被量为0.12-0.24μg，所述的催化反应液为含有TMB和双氧水的PH为3-5的缓冲溶液；所述催化反应液中双氧水浓度为0.1-0.2mM；TMB浓度为0.05-0.1mM，提供待测样品溶液，将纳米酶标记的识别黄曲霉毒素B1的单克隆抗体溶液和纳米酶标记的识别伏马毒素B1的单克隆抗体溶液，用检测缓冲液稀释混匀，加入待测样品溶液，孵育一段时间；将免疫层析试纸条的样品垫插入到前述混合溶液中，待质控线的黑色条带出现后，在检测线处再加入催化反应液，一段时间后，测定获得检测线的RGB值，基于RGB值-待测物浓度标准曲线即RGB值-伏马毒素B1浓度标准曲线和RGB值-黄曲霉毒素B1浓度标准曲线，进行待测物伏马毒素B1和黄曲霉毒素B1含量的定量分析；所述的纳米酶是以硝酸锌和2-甲基咪唑作为有机金属框架ZIF-8的前驱物，血红素作为单原子铁的前驱物，经过原位高温碳化制得，高温碳化温度为800-900℃，碳化时间为1.5-2.5h，血红素按质量百分比计，为硝酸锌的5-10%，所述纳米酶的粒径为100-200nm的规则菱形十二面体颗粒，铁、碳、氮元素均一分布，且铁元素以单原子形式存在碳基底上，所述纳米酶标记的识别黄曲霉毒素B1的单克隆抗体溶液为由纳米酶溶液和抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体混合，室温搅拌离心得到的，所述纳米酶标记的识别伏马毒素B1的单克隆抗体溶液为由纳米酶溶液与抗伏马毒素B1单克隆抗体混合，室温搅拌离心得到的，所述的待检测物分别为黄曲霉毒素B1和伏马毒素B1，抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的IC50小于等于1.6ngmL；抗伏马毒素B1单克隆抗体的IC50小于等于0.32ngmL。

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