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摘要：本发明涉及一种玉米叶片浸提液水琼脂法高效分离多堆柄锈菌单孢的方法，该方法包括接种材料播种及管理、浸提液水琼脂培养基的制备、多堆柄锈菌孢子悬浮液制备、多堆柄锈菌单孢筛选和接种、多堆柄锈菌单孢扩繁等步骤，分离出多堆柄锈菌单孢。配制的平板培养基呈现轻微绿色，和多堆柄锈菌本身的红色区别明显，能清晰地判断多堆柄锈菌单孢，使挑取多堆柄锈菌单孢的效率及准确率大大提高。采用单孢分离技术可一代快速获得纯化的多堆柄锈菌单孢子，减少接种代数，操作简单，能有效避免孢子间的交叉污染，提高获取单孢的成功率。

主权项：1.一种玉米叶片浸提液水琼脂法高效分离多堆柄锈菌单孢的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：S1、接种材料播种及管理选取籽粒饱满的玉米种子，用双氧水浸泡种子进行消毒，然后用无菌水冲洗，将种子播种于装有营养土的花盆中，浇透水后室温下培育；S2、浸提液水琼脂培养基的制备采集玉米生长至5-6叶时期的新鲜叶片，去除中间叶脉后用超纯水洗净后滤干，切割成小段，向叶片中加入适量蒸馏水，研磨成浆液，用纱布过滤，制成玉米叶片浸提液原液；将所述玉米叶片浸提液原液与水琼脂溶液混合，得到玉米叶片浸提液水琼脂培养基；将配好的玉米叶片浸提液水琼脂培养基倒入培养皿，制成水琼脂平板，备用；S3、多堆柄锈菌孢子悬浮液制备采集田间带有多堆柄锈菌的玉米叶片，置于敞口烧杯中，加入超纯水后反复搓洗，过滤，洗脱后配制成浓度为1×103-1×105个ml的孢子悬浮液；S4、多堆柄锈菌单孢筛选和接种用移液枪吸取孢子悬浮液至所述的水琼脂平板上，将孢子悬浮液涂布均匀，然后将水琼脂平板分割成0.3cm×0.3cm大小的水琼脂块；将水琼脂平板放在体视显微镜下，找到只有一个孢子的水琼脂块后用挑针挑出孢子，将水琼脂块上有孢子的一面置于处理过的玉米叶片上；在玉米叶片上喷水保湿，26℃黑暗保湿6-48小时；孢子接种后10-15天，待看见明显的孢子堆时取孢子，经纯化培育得到多堆柄锈菌单孢；S5、多堆柄锈菌单孢扩繁当孢子堆开裂后，将其接种至新鲜玉米叶片上进行扩繁。

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