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一种青霉素过敏性猝死动物模型的构建方法 

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摘要:本发明涉及一种青霉素过敏性猝死动物模型的构建方法,首先从不同动物种类探究其对青霉素的敏感性。其次,探究不同剂量青霉素对过敏反应严重程度的影响,最后,探讨青霉素在不同致敏次数和不同激发间隔时间下引起的过敏反应严重程度。本发明还结合动物的过敏症状并进行行为学评分评估过敏反应强度,计算过敏发生率及死亡率,并采用酶联免疫分析方法检测结肠壁组织匀浆中IgE、IgG、HIS、β‑Hex含量的变化,及对肺组织切片进行HE染色、甲苯胺蓝染色和类胰蛋白酶免疫组化染色。本发明以在法医实践中常见的过敏性猝死药物青霉素作为致敏原,综合考虑动物种类、药物剂量以及致敏激发次数等因素,建立青霉素过敏性猝死动物模型,为研究青霉素过敏性猝死的病理生理机制和法医学诊断提供可靠的实验基础,为法医学鉴定提供科学依据和技术支持。

主权项:1.一种青霉素过敏性猝死动物模型的构建方法,其特征在于,具体包括以下步骤:S1、制备不同动物种类的青霉素过敏性猝死动物模型,S101、选取动物种类,具体包括:①SD大鼠8周龄,200±20g,②BN大鼠8周龄,200±20g,③小鼠8周龄,20±10g,④ICR小鼠8周龄,20±10g,每种动物42只;S102、对选取的动物进行适应性喂养,保证动物房的室温维持在20~25℃,相对湿度控制在40%~70%,于光暗交替环境中12h:12h饲养,动物饲料采用SPF鼠饲料;S103、适应性喂养1周后,每种动物分别随机分为7组n=6:生理盐水NS组、鸡卵清白蛋白OVA组、牛血清白蛋白BSA组、青霉素PG组、低剂量青霉素完全抗原Lowdose组、中等剂量青霉素完全抗原Mediumdose组和高剂量青霉素完全抗原Highdose组;S104、构建实验过程分为“致敏原致敏处理阶段”和“致敏原激发处理”,每组动物分别于实验第1、3、5天腹腔注射相应的过敏原,同时加等量的AlOH3,于末次致敏后第14天即实验第19天,各组动物分别静脉缓慢注射双倍剂量相应过敏原进行激发;S105、激发后观察各组动物的过敏症状并进行行为学评分,处理样本和收集相应的数据,选取最佳动物种类进行下一步骤模型的制备;S2、制备不同剂量青霉素的过敏性猝死动物模型,S201、设置青霉素致敏剂量,结合不同种类动物过敏反应动物模型的研究结果,最终确定的致敏剂量分别为150万IUkg、100万IUkg、50万IUkg和5万IUkg,并用于后续实验;S202、选取SPF级ICR小鼠8周龄,20±10g30只,动物房的室温维持在20~25℃,相对湿度控制在40%~70%,于光暗交替环境中12h:12h饲养,动物饲料采用SPF鼠饲料;S203、随机分组,适应性喂养1周后,随机分为5组n=6:NS组、150万IUkg组、100万IUkg组、50万IUkg组和5万IUkg组;S204、每组动物分别于实验第1、3、5天腹腔注射相应的过敏原,并配上等量的AlOH3致敏,于末次致敏后第14天即实验第19天,各组动物分别静脉缓慢注射双倍剂量相应过敏原进行激发;S205、激发后观察各组动物的过敏症状并进行行为学评分,处理样本和收集相应的数据,选取最佳青霉素剂量进行下一步骤模型的制备;S3、制备不同致敏次数和不同激发间隔时间的青霉素过敏性猝死动物模型,S301、选取SPF级ICR小鼠8周龄,20±10g30只,动物房的室温维持在20~25℃,相对湿度控制在40%~70%,于光暗交替环境中12h:12h饲养,动物饲料采用SPF鼠饲料;S302、适应性喂养1周后,随机分为5组n=6,依据不同致敏次数和不同激发间隔时间分别为NS组、3-14组、3-21组、5-14组和5-21组;S303、对NS组和3-14组每只动物分别隔日腹腔注射对应的过敏原,同时配上等量的AlOH3致敏,共3次,于末次致敏后第14天,静脉缓慢注射双倍剂量过敏原进行激发,3-21组激发时间改为末次致敏后的第21天,其他方法同3-14组;5-14组的每只鼠分别隔日腹腔注射对应的过敏原,同时配上等量的AlOH3致敏,共5次,于末次致敏后第14天,静脉缓慢注射双倍剂量过敏原进行激发,5-21组激发时间改为末次致敏后的第21天,其他方法同5-14组;S304、激发后观察各组动物的过敏症状并进行行为学评分,处理样本,收集最终成型的模型相应的数据;S4、对比上述S1、S2和S3中的模型数据,得出最终的青霉素过敏性猝死动物模型。

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