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一种Kcna1基因敲除导致癫痫猝死动物模型的构建及其应用 

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申请/专利权人：中南大学湘雅医院

摘要：本发明涉及动物基因工程领域，具体涉及一种Kcna1基因敲除导致癫痫猝死的动物模型的构建方法及其应用。本发明采取的技术方案为：载体设计和构建；将构建好的sgRNA载体和Cas9载体进行体外转录；将sgRNA和Cas9mRNA共注射至C57BL6N小鼠受精卵中；Cas9蛋白在sgRNA引导下结合到靶位点，造成DNA双链断裂，从而实现Kcna1基因的敲除。由此可得到国内首个经CRISPRCas9技术构建的Kcna1全基因敲除导致SUDEP的动物模型，为进一步研究其病理生理学机制及可能治疗靶点奠定了良好的基础。

主权项：1.一种Kcna1基因敲除导致癫痫猝死动物模型的构建方法，其特征在于：所述构建方法包括如下步骤：1构建两对靶向小鼠Kcna1基因的特异性sgRNA1sgRNA2，sgRNA3sgRNA4；所述sgRNA1序列如SEQ.ID.NO.1所示；所述sgRNA2序列如SEQ.ID.NO.2所示；所述sgRNA3序列如SEQ.ID.NO.3所示；所述sgRNA4序列如SEQ.ID.NO.4所示；SEQ.ID.NO.1:GCAATAGAACTCGCTGTTCATGG；SEQ.ID.NO.2:GGTGCAAGCGAACTCCATGATGG；SEQ.ID.NO.3:GACCAGCCTTGTCCTAGCGCTGG；SEQ.ID.NO.4:AACACCCTACCTCATTCGCTTGG；2采用所述特异性sgRNA1sgRNA2、sgRNA3sgRNA4构建基于CRISPRCas9基因编辑技术的Kcna1基因靶向载体，进行体外转录，制备mRNA；3将所述sgRNA1-4和Cas9mRNA分别共注射至野生型小鼠受精卵内，经胚胎移植入假孕母鼠体内，获得F0代小鼠，经配繁与鉴定，得到纯合型Kcna1基因敲除小鼠动物模型。

全文数据：

权利要求：

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