买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

摘要：本发明涉及病理检测技术领域，具体为一种基于液基细胞学的P16、Ki67双染联合HE染色的多重染色方法，包括以下步骤，S1，细胞片制备；S2，抗原修复；S3，抗体孵育；S4，显色；S5，水化；S6，苏木素染色；S7，伊红染色。通过四重染色步骤与两种技术手段，将不同染色方式顺次进行，在同一玻片中呈现四种不同的染色情况，可同时识别目标蛋白表达情况和细胞形态，方便快捷，减少实验耗时，提升检测效率，在同一张玻片上同时染出棕色，紫色，粉红色和蓝色，颜色之间干扰较小，同时提供特殊的修复液配方，保证细胞和组织的完整性，准确识别异常细胞形态与相关调控蛋白的表达情况，精确获取病理信息，提升检测效率及准确率。

主权项：1.一种基于液基细胞学的P16、Ki67双染联合HE染色的多重染色方法，其特征在于：包括以下步骤，S1，细胞片制备；用3.2mL液基细胞稀释液稀释300μl宫颈脱落细胞样本，置于制片单元中，500rpm转速下离心3分钟，取出细胞片用流水清洗数秒，95％酒精中固定5分钟放置2-8℃备用；S2，抗原修复；加热块加热至80℃，持续2分钟，脱蜡液80℃孵育1分钟，重复4次，开启散热，酒精孵育1分钟，重复4次，开启散热，TBS清洗1分钟，重复4次，抗原修复液清洗1分钟，重复2次，抗原修复液加热97℃，10分钟，重复2次，抗原修复液加热97℃，2分钟，散热20分钟，抗原修复液散热2分钟，重复2次，TBS清洗液散热2分钟，重复4次；S3，抗体孵育；过氧化物酶双染阻断剂孵育10分钟，TBS清洗液清洗1分钟，重复4次，P16Ki67一抗孵育30分钟，TBS清洗液清洗1分钟，重复4次，双染二抗孵育15分钟，TBS清洗液清洗1分钟，重复4次；S4，显色；NBTBCIP显色液孵育10分钟，TBS清洗液冲洗1分钟，重复4次，配制DAB显色液，DAB显色液孵育5分钟，TBS清洗液冲洗1分钟，重复4次；S5，水化；将染色后的细胞片从仪器取出，依次在100％、100％、95％、95％、85％、75％的乙醇中水化1分钟，纯水冲洗5分钟；S6，苏木素染色；甩干多余水分，苏木素染色液染色5分钟，流水冲洗，1％盐酸酒精分化4秒，流水冲洗，返蓝液中返蓝30秒；S7，伊红染色；0.5％伊红染液染色30～35秒，75％、85％、95％和100％乙醇进行脱水，二甲苯中透明5分钟，重复2次，水性封片剂封片后显微镜下观察。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 杭州百殷生物科技有限公司 一种基于液基细胞学的P16、Ki67双染联合H&E染色的多重染色方法