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申请/专利权人：李文杰

申请日：2019-03-15

公开（公告）日：2024-12-20

公开（公告）号：CN119162282A

专利技术分类：..材料的抗微生物活性试验[2006.01]

专利摘要：本发明涉及一种抗菌陶瓷细菌杀灭效果测评方法，测试步骤包括：样品制备及前处理；设备及试剂选择、培养基配制；菌种保藏、活化及菌悬液制备；OD值‑活菌含量对数值lgCB标曲建立及接种菌液CB标定；lgCB‑相对荧光强度对数值lgIB标曲建立；样品接种、培养及洗脱回收；回收液IB测定及其活菌含量CB和TB推算；抗菌率R或抗菌活性值A计算；结果评价；其特别之处在于：应用ATP荧光光度计对以R或A表征的抗菌陶瓷细菌杀灭效果进行测评。本发明规定洗脱回收接触0h及培养24h后对照样品和抗菌样品，测定回收液IB并以lgIB表征和计算R或A；进行结果评价。本发明研发的抗菌陶瓷细菌杀灭效果测评的ATP荧光快检法，将以先进检测技术支撑产品质量提升和市场秩序规范。

专利权项：1.一种抗菌陶瓷抗细菌性能的检测方法，包括：①样品制备及前处理；②设备选型及试剂、培养基配制；③菌种保藏、活化及菌悬液制备；④OD值-活菌含量对数值lgCB标准曲线建立及接种菌液CB标定；⑤活菌含量对数值lgCB-相对荧光强度对数值lgIB标准曲线建立；⑥样品接种、培养及洗脱回收；⑦回收液相对荧光强度值IB测定；⑧回收液活菌含量CB和TB推算及抗菌率R和抗菌活性值A计算；⑨结果评价；其特征在于，应用ATP荧光光度计对以抗菌率R或抗菌活性值A表征的抗菌陶瓷抗细菌性能进行精准定量测试的ATP生物荧光lgCB-lgIB标准曲线法，具体的：在回收液相对荧光强度值IB测定中：明确对照样品和抗菌样品的数量、尺寸及吸水率要求，对样品采取灭菌和吸水处理；将试验标准菌株进行传代、活化后，取连续转接2次的新鲜细菌培养物制备菌悬液，应用MTT比色分析法进行活菌计数，建立OD值-活菌含量对数值lgCB标准曲线，推导得出曲线的线性方程式Y＝a0X+b0及相关系数R02；并对接种菌液进行活菌含量CB标定：5.0×106CFUmL～9.0×106CFUmL，同时，选择CB为4.2×103CFUmL、4.2×104CFUmL、4.2×105CFUmL的稀释液作为标准系列菌悬液；测定其相对荧光强度值IB，绘制lgCB-lgIB标准曲线，并推导得出曲线的线性方程式Y＝aBX+bB及相关系数RB2，然后，向各组对照样品和抗菌样品待测釉面分别滴加0.3mL菌液；立即用4.7mL洗脱液对6组0h接触样品进行洗脱回收，应用ATP荧光光度计测定回收液的相对荧光强度值IBC0ij、IBT0ij，根据曲线方程式Y＝aBX+bB推算其活菌含量CB0ij和TB0ij，同时，将6组24h接触样品密封于无菌平皿内，37℃±1℃、90％±2％RH培养24h±2h后；采用与0h接触样品相同的方式回收釉面残留菌并测定其回收液相对荧光强度值IBCtij、IBTtij，推算相应的活菌含量CBtij和TBtij；在抗菌率R及抗菌活性值A计算中：根据试验菌种标准曲线lgCB-lgIB的线性方程式Y＝aBX+bB，以0h接触及24h培养后每件对照样品和抗菌样品回收液的相对荧光强度测定值和作为基础数据；在试验有效条件下，计算其经24h培养后的细菌增长值Fij、Gij以及抗菌率Rij和抗菌活性值Aij；对每组样品的Rij和Aij取算术平均值得到相应的Ri和Ai；每批抗菌陶瓷样品的抗菌率R和抗菌活性值A为其3组样品Ri和Ai的算术平均值；并明确相关数据修约和测量不确定度要求；细菌增长值Fij、Gij计算：每件对照样品和抗菌样品经24h培养后，细菌增长值Fij、Gij分别按照公式1、2计算： 式中：Fij和Gij—每件对照样品和抗菌样品经24h培养后的细菌增长值，样品组别i＝1,2,3；每组样品编号j＝1,2,3,4,5；CB0ij和CBtij—每件0h接触和经24h培养后对照样品回收的活菌量，单位为菌落形成单位每毫升，CFUmL； 和—每件0h接触和经24h培养后对照样品回收液的相对荧光强度测定值，RLU；TB0ij和TBtij—每件0h接触和经24h培养后抗菌样品回收的活菌量，单位为菌落形成单位每毫升，CFUmL； 和—每件0h接触和经24h培养后抗菌样品回收液的相对荧光强度测定值，RLU；aB—标准曲线lgCB-lgIB斜率；抗菌率R计算：试验有效条件下，每件抗菌陶瓷样品的抗菌率Rij、每组及每批样品的抗菌率Ri和R分别按照公式3、4、5计算： 式中：Rij—每件抗菌陶瓷样品的抗菌率，％；Ri—每组抗菌陶瓷样品的抗菌率，％；R—每批抗菌陶瓷样品的抗菌率，％；TBtij和CBtij—每件抗菌样品和对照样品经24h培养后回收的活菌量，单位为菌落形成单位每毫升CFUmL； 和—每件抗菌样品和对照样品经24h培养后，回收液的相对荧光强度测定值，RLU；抗菌活性值A计算：试验有效条件下，每件抗菌陶瓷样品的抗菌活性值Aij、每组及每批样品的抗菌活性值Ai和A分别按照公式6、7、8计算： 式中：Aij—每件抗菌陶瓷样品的抗菌活性值；Ai—每组抗菌陶瓷样品的抗菌活性值；A—每批抗菌陶瓷样品的抗菌活性值；在结果评价中：参考卫生行业通用做法和相关抗菌产品标准要求，确定抗细菌性能分级判定标准；当某组件抗菌陶瓷样品的抗菌率RiRij或抗菌活性值AiAij与其他两组四件样品的抗细菌性能相比至少相差一个水平级时，重新提取一组件样品重复实验；计算其经ATP生物荧光lgCB─lgIB标准曲线法测得的抗菌率或抗菌活性值，如果前后两组件抗菌陶瓷样品抗细菌性能水平相同，则弃之；取另外两组四件剩余样品抗菌率RiRij或抗菌活性值AiAij的算术平均值作为该批次组抗菌陶瓷样品抗细菌性能的评价结果。

百度查询： 李文杰 一种抗菌陶瓷细菌杀灭效果测评方法