恭喜山东大学邹桂征获国家专利权
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龙图腾网恭喜山东大学申请的专利一种辐射波段位于蓝绿光区的光谱分辨型高度单色电化学发光免疫传感器获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115060712B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-18发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210653215.8,技术领域涉及:G01N21/76;该发明授权一种辐射波段位于蓝绿光区的光谱分辨型高度单色电化学发光免疫传感器是由邹桂征;高旭雯设计研发完成,并于2022-06-09向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种辐射波段位于蓝绿光区的光谱分辨型高度单色电化学发光免疫传感器在说明书摘要公布了:本发明涉及一种辐射波段位于蓝绿光区的光谱分辨型高度单色电化学发光免疫传感器,本发明首先合成了一种具有高度单色电化学发光辐射的水溶性金纳米簇AuNCs,以AuNCs为标记物构建了一种光谱分辨型、高度单色的电化学发光免疫传感器。所得传感器的半峰宽为36nm,最大辐射波长为485nm,位于蓝绿光区域,突破了已报道的以纳米粒子为标记物的光谱分辨型电化学发光免疫传感器的最大辐射波长仅限于500nm以上的局限性,丰富了高度单色ECL免疫传感的波段范围。
本发明授权一种辐射波段位于蓝绿光区的光谱分辨型高度单色电化学发光免疫传感器在权利要求书中公布了:1.一种最大辐射波长为485纳米、半峰宽为36纳米的光谱分辨型高度单色电化学发光免疫传感器,所述电化学发光免疫传感器包括AuNCs-Ab2、非特异性结合位点被封闭的CEA-Ab1以及分别与AuNCs-Ab2和CEA-Ab1通过抗原-抗体间的相互作用连接的癌胚抗原;所述AuNCs-Ab2为水溶性金纳米簇AuNCs标记的所述抗原对应的第二抗体;AuNCs是以氯金酸为金源,巯基丙酸为稳定剂,乙酸锌为聚集诱导体,制得的水溶性金纳米簇AuNCs;AuNCs的合成步骤为:(1)取35.5μL100mgmL的HAuCl4∙3H2O,加入2.5mL去离子水;(2)向步骤(1)中加入50μL巯基丙酸,搅拌15min;(3)向步骤(2)中加入430μL1M氢氧化钠,调节pH至8.5;(4)向步骤(3)中加入0.5mL0.1M乙酸锌,室温搅拌反应6h,反应完成后,采用异丙醇洗涤纯化后,得到水溶性金纳米簇AuNCs;所述AuNCs-Ab2具体制备步骤如下:将纯化后的AuNCs溶解于1mL含有10mgmL1-乙基-(3-二甲基氨基丙酸)碳二亚胺盐酸盐和10mgmL羟基琥珀酰亚胺的0.1MpH6.0磷酸盐缓冲溶液中,活化30min,离心纯化,再分散于1mLpH7.40.1M磷酸盐缓冲溶液中,得到活化的AuNCs;加入20μL10mgmLCEA标记抗体CEA-Ab2,37℃下恒温孵育3-5h,加入20μL牛血清蛋白封闭30min,离心收集沉淀,得到AuNCs-Ab2;最大辐射波长为485纳米、半峰宽为36纳米的光谱分辨型高度单色电化学发光免疫传感器的构建方法,具体如下:a.将清洁的Au电极在10mM巯基丙酸中浸泡过夜,通过Au-S键将MPA键合到电极表面;b.向a所得的修饰电极表面滴加10μL10mgmL1-乙基-(3-二甲基氨基丙酸)碳二亚胺盐酸盐和10mgmL羟基琥珀酰亚胺,活化30min,清洗电极,除去未反应的1-乙基-(3-二甲基氨基丙酸)碳二亚胺盐酸盐以及羟基琥珀酰亚胺;清洗电极所用冲洗液为10mMpH=7.4的磷酸盐缓冲溶液,癌胚抗原CEA浓度为0.3pgmL~50ngmL;c.将20μL10mgmLCEA一抗CEA-Ab1滴加到b所得的活化电极表面,孵育3h,加入牛血清蛋白封闭电极上未反应的活性位点,清洗电极;牛血清蛋白的体积分数为1%,清洗电极所用冲洗液为10mMpH=7.4的磷酸盐缓冲溶液,癌胚抗原CEA浓度为0.3pgmL~50ngmL;d.纯化后的AuNCs溶解于含有1-乙基-(3-二甲基氨基丙酸)碳二亚胺盐酸盐和羟基琥珀酰亚胺的磷酸盐缓冲溶液中活化,然后加入CEA标记抗体CEA-Ab2,37℃下恒温孵育3-5h,加入牛血清蛋白封闭30min,得到AuNCs-Ab2;牛血清蛋白的体积分数为1%;e.将Ag标记癌胚抗原CEA-Ag滴加到c处理后的电极表面,室温孵育90min,清洗电极,再将10μLAuNCs-Ab2滴加到电极表面孵育1h;基于形成免疫复合物的形式将AuNCs-Ab2枝接并固定到工作电极表面,实现高度单色电化学发光免疫传感器的制备;清洗电极所用冲洗液为10mMpH=7.4的磷酸盐缓冲溶液,癌胚抗原CEA浓度为0.3pgmL~50ngmL;使用所述的高度单色电化学发光免疫传感器进行抗原检测的方法,步骤如下:I:以高度单色电化学发光免疫传感器为工作电极,铂电极为对电极,AgAgCl电极为参比电极,在含10mM水合肼的Hepes缓冲溶液中,采用循环伏安法驱动固定于金电极表面的金纳米簇AuNCs产生电化学发光;II:以曝光成像方式收集电化学发光全过程的所有光子,并基于色散电化学发光辐射全部光子的方式获取总光谱;依据光谱曲线上最大辐射波长处光强与抗原标准溶液浓度之间的关系,绘制工作曲线;III:将待测样品按照步骤I和II中的方法进行电化学发光光谱测试,根据所得电化学发光光谱曲线上最大辐射波长处的光强信号和工作曲线,检测待测样品溶液中的抗原浓度。
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