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申请/专利权人：扬州大学

摘要：本发明涉及家禽育种领域，具体涉及一种利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法。该方法是提取待测样本的基因组DNA，经序列如SEQ ID NO：1‑2所示的特异性引物扩增得到186bp的目的片段，目的片段经SSCP分析，凝胶电泳后用银染显色，得到DNA的SSCP图谱，根据图谱的带型筛选基因型为AA的个体。统计分析表明AA型个体的屠体重、胸肌重、腿肌重、全净膛重和半净膛重均显著的高于GG型P0.05。AA纯合型能够在后代中加以固定，该检测方法简单快捷，且不受外界环境的影响。

主权项：一种利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法，其特征在于，提取待测样本的基因组DNA，经序列如SEQ ID NO：1‑2所示的特异性引物扩增得到186bp的目的片段，目的片段经SSCP分析，凝胶电泳后用银染显色，得到DNA的SSCP图谱，根据图谱中的带型筛选京海黄鸡中基因型为AA的个体。

全文数据：利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法技术领域[0001]本发明涉及家禽育种领域，具体涉及一种利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法。背景技术[0002]随着国民经济的发展和人民生活水平的不断提高，人们对优质肉鸡的需求越来越迫切，而优质肉鸡普遍存在着生产速度缓慢，产肉能力差等问题。优质肉鸡屠宰性能的改良，一直受到是育种工作者关注，而传统育种方法的使用，进展缓慢，迫使和刺激育种学家寻找新的途径和方法。寻找到屠宰性能的分子遗传标记用于标记辅助选择，将能加速优质肉鸡屠宰性能的改良。[0003]MSTN基因，也就是肌肉生长抑制素基因，是骨骼肌生长的负调控因子。前期研究发现该基因的C.234突变对边鸡的生长性状具有显著或极显著的影响。因此探索MSTN基因的C.234突变对京海黄鸡的屠宰性能的影响具有重要的意义。发明内容[0004]本发明要解决的技术问题是提供一种利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法，该方法利用MSTN基因的突变对京海黄鸡屠宰性能进行标记辅助选择，不受环境影响。[0005]本发明公开了MSTN基因作为京海黄鸡屠宰性能分子标记的应用。具体是选择MSTN基因编码区的234bp处等位基因为A的纯合个体。[0006]本发明还公开了利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法。[0007]基于上述应用的利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法:提取待测样本的鸡基因组DNA，经序列如SEQIDN0:1-2所示的特异性引物扩增得到186bp的片段，目的片段经SSCP分析，凝胶电泳后用银染显色，得到DNA的SSCP图谱，根据图谱中的带型筛选基因型为AA的个体。[0008]本发明的原理是：针对MSTN基因设计1对引物P1，引物P1扩增产物存在3种基因型，测序结果与MSTN基因原序列®enBankID:AF346599比对发现，在外显子1序列的234bp处有G-A的点突变，如图2，GG型在编码区的234bp处等位基因为G，GA型的等位基因为G和A，AA型的等位基因为A。统计分析表明AA基因型的屠体重、胸肌重、腿肌重、全净膛重和半净膛重均显著的高于GG型P〈0.05AA纯合型能够在后代中加以固定，该检测方法简单快捷，且不受外界环境的影响，可作为提高京海黄鸡屠宰性能的方法。附图说明[0009]图1是MSTN基因扩增产物的PCR-SSCP图谱。[0010]图2是MSTN基因不同基因型的测序图。具体实施方式[0011]实施例[0012]l.i实验动物[0013]随机采取的353只京海黄鸡母鸡血样来自于江苏省京海禽业集团有限公司。翅静脉采集血样1.5mL，肝素抗凝，-20°c保存。常规苯酚-氯仿法抽提基因组DNA，对基因组DNA进行0D值测定，并记录其浓度后备用。140日龄时对试验群体进行屠宰，测定其屠体重、全净膛重、半净膛重、胸肌重和腿肌重。[0014]1.2引物设计与PCR扩增[0015]根据GenBank中已发表的MSTN基因序列（登录号为:AF346599，采用Primer5.0设计1对引物，扩增产物大小为186bp。引物序列如下：[0016]PI：F：57-GCATTAGCAGGGACGTTAT-37SEQIDNO：1[0017]R：57-GAAAGCAGCAGGGTTGTTA-37SEQIDNO：2[0018]PCR反应体系为20yL，包括lOXBuffer2yL，MgCl225mmolL2.2yL，dNTPslOmmolL0.8yL，上下游引物（ΙΟμmolL各lyL，模板lyL，TaqDNA聚合酶0.2yL，双蒸水11·Syl^PCR扩增程序为94°C预变性6min;94°C变性30s，56·0°C退火30s，72°C延伸30s，30个循环;最后72°C延伸性10min，10°C保存产物。[0019]1.3SSCP分析[0020]2yLPCR产物和7yL上样缓冲液98%甲酰胺、0.025%溴酚蓝、0.025%二甲苯氰、10mmolLEDTApH8.0、10%甘油）混匀，98°C变性10min，然后冰浴5min。采用150V进行非变性聚丙烯酰胺凝胶PAGE30%，Acr:Bis=29:1电泳，7~9h后银染显色，PCR-SSCP图谱如图1。[0021]1.4MSTN基因不同基因型对京海黄鸡屠宰性能的遗传效应[0022]采用下列模型分析不同基因型对京海黄鸡屠宰性能的影响:Υ=μ+基因型效应+残差效应。MSTN不同基因型对京海黄鸡屠宰性能的遗传效应见表1。[0023]表1MSTN基因C.234位点不同基因型与京海黄鸡屠体性状的相关性分析[0024][0025]注：同行标识不同字母表示差异显著P〈0.05。[0026]由表可见，AA型个体的屠体重、胸肌重、腿肌重、全净膛重和半净膛重均显著的高于GG型P〈0.05。所以根据MSTN基因的SSCP带型筛选AA基因型的个体可作为提高京海黄鸡屠宰性能的方法。

权利要求：1.一种利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法，其特征在于，提取待测样本的基因组DNA，经序列如SEQIDNO:1-2所示的特异性引物扩增得到186bp的目的片段，目的片段经SSCP分析，凝胶电泳后用银染显色，得到DNA的SSCP图谱，根据图谱中的带型筛选京海黄鸡中基因型为AA的个体。2.MSTN基因作为京海黄鸡屠宰性能分子标记的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，选择MSTN基因编码区的234bp处等位基因为A的纯合个体。

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