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申请/专利权人：大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司

摘要：本发明属于天然有机化学领域，涉及来源于返魂草中的绿原酸提取、分离方法。本发明的优点：1、本发明采用超声波辅助提取技术，加速了目标成分进入溶剂，促进提取的进行。具有节约能源、提取效率高，适应性广，成本低，同时可避免高温对有效成分的影响等优点。2、有效地采用了一系列纯化工艺，包括醇沉、多次萃取、活性炭除杂和层析柱纯化等工艺，与传统提取方法相比，可大大提高提取效率，加大提取物的纯度，避免醇提铅沉所带来的重金属铅污染。本发明制备的绿原酸可广泛应用于保健食品和药品等领域。3、从返魂草中提取并经过一系列精制工艺获得的绿原酸样品利用反相高效液相色谱RP‑HPLC进行定性和定量分析，同时验证了本发明的科学性。

主权项：一种由返魂草提取和制备绿原酸的方法，其包括下列步骤：1提取：利用超声波辅助提取法提取返魂草中绿原酸组分，提取温度为60℃，提取时间为60分钟，乙醇浓度为40％，料液比为1∶45，超声波功率为300W，超声波频率为60kHz。提取液减压浓缩至浸膏水溶液状态，得绿原酸浸膏水溶液；2乙醇除杂：将绿原酸浸膏水溶液中加入乙醇，醇沉后过滤，得滤液；3多次萃取：将醇沉除杂后所得滤液旋转蒸发去除乙醇，剩余溶液中加入乙酸乙酯进行萃取，然后再在绿原酸浸膏水溶液中加入8％的硫酸铵固体用乙酸乙酯‑乙醇91∶9，vv作为萃取剂进行多次萃取；4活性炭除杂：在乙酸乙酯‑乙醇层加入一定量活性炭；5减压浓缩：萃取液再经减压浓缩，旋蒸温度在40～80℃，10～400mmHg压力的条件下进行浓缩，回收有机溶剂，得绿原酸粗品；6柱层析：将上述绿原酸粗品制成水溶液，改变溶液的pH值，过装有吸附材料的层析柱，随后用不同浓度的洗脱液进行洗脱，分段收集解吸液，洗脱液为乙醇溶液，浓度为10～90％；7重结晶、干燥：将分段收集到的上述解吸液在真空条件下浓缩干燥得其固体，再选用甲醇溶解该固体，降低温度，待其析出结晶；8检测步骤：利用反相高效液相色谱RP‑HPLC测定返魂草中绿原酸含量。

全文数据：一种由返魂草提取和制备绿原酸的方法技术领域[0001] 本发明属于天然有机化学领域，涉及一种由返魂草提取个制备绿原酸的方法。背景技术[0002] 返魂草为菊科千里光属多年生草本植物，又名麻叶千里光、紫苑等。主要分布于我国东北、西北和华北部分省区。主入肺经，有清热去痰、镇咳平喘、治疗肺病、活性消肿之功效。绿原酸是返魂草中主要的药效成分之一，具有抗菌、抗炎、抗病毒等功效。此外，绿原酸还具有降血脂、降血糖、调节免疫力的作用。可应用于食品工业、化妆品工业、医药工业中。[0003] 近年来，随着国际上天然健康产业的不断发展，中草药的现代化进程飞速发展，人们对中草药提取物的需求不断加大，同时对中草药的质量提出了更新、更高的要求，特别是欧、美等国家制药企业对中药提取物中的单体成份含量要求极高。[0004] 在中国，东北是返魂草主要分布区域，但以返魂草为原料提取制成的绿原酸等相关市售产品较少，且含量较低，严重影响了产品的应用范围和附加值。纯品绿原酸主要依靠进口，价格十分昂贵。高纯度的绿原酸产品上市量很少，远不能满足市场需求，其原因在于制取工艺的相对落后，缺乏大规模生产高纯度绿原酸的综合技术。大量相关文献表明，采用单一方法从返魂草中提纯和制备绿原酸无法达到理想的纯度，本发明采用了一系列精制工艺，得到了高纯度绿原酸产品，同时其生产工艺在国内、外尚未见到报道。发明内容[0005] 本发明所要解决的技术问题是:提供一种由返魂草提取和制备绿原酸的方法，其能提高产品的纯度、收率和生产规模，降低提取分离成本。[0006] 为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案:提供一种从返魂草中提取和制备绿原酸的方法，包括如下步骤:[0007] I提取:利用超声波辅助提取法提取返魂草中绿原酸组分，提取温度为60°C，提取时间为60分钟，乙醇浓度为40%，料液比为1:45，超声波功率为300W，超声波频率为60kHzο提取液减压浓缩至浸膏水溶液状态，得绿原酸浸膏水溶液；[0008] 2乙醇除杂:将绿原酸浸膏水溶液中加入乙醇，醇沉后过滤，得滤液；[0009] 3多次萃取:将醇沉除杂后所得滤液旋转蒸发去除乙醇，剩余溶液中加入乙酸乙酯进行萃取，然后再在绿原酸浸膏水溶液中加入8%的硫酸铵固体用乙酸乙酯-乙醇91:9，vv作为萃取剂进行多次萃取；[0010] ⑷活性炭除杂:在乙酸乙酯-乙醇层加入一定量活性炭；[0011] 5减压浓缩:萃取液再经减压浓缩，旋蒸温度在40〜80°C，10〜400mmHg压力的条件下进行浓缩，回收有机溶剂，得绿原酸粗品；[0012] 6柱层析:将上述绿原酸粗品制成水溶液，改变溶液的pH值，过装有吸附材料的层析柱，随后用不同浓度的洗脱液进行洗脱，分段收集解吸液，洗脱液为乙醇溶液，浓度为10〜90%；[0013] 7重结晶、干燥:将分段收集到的上述解吸液在真空条件下浓缩干燥得其固体，再选用甲醇溶解该固体，降低温度，待其析出结晶；[0014] ⑶检测步骤:利用反相高效液相色谱RP-HPLC测定返魂草中绿原酸含量；[0015] 所述步骤2中，乙醇加入量与绿原酸浸膏水溶液的体积比为3〜8:I，醇沉静置时间为4〜8小时，醇沉温度为4〜25°C。[0016] 所述步骤⑷中，活性炭加入比例为100ml:3g。[0017] 所述步骤6中，用lmolLHCl溶液调整绿原酸粗品水溶液的pH值为3.0左右，层析柱中填料的型号为NKA-9，洗脱液为不同浓度的乙醇水溶液。[0018] 所述步骤8中，利用反相高效液相色谱RP-HPLC测定返魂草中绿原酸含量的方法为:绿原酸标准品和待检样品均用50%甲醇溶液溶解并定容,EclipseXDB-Cl8150mmX4.6mm,5um色谱柱，乙腈-0.4%磷酸12:88，VV为流动相，柱温:室温，检测波长为327nm，流速:lmLmin，进样量20uL。具体实施方式[0019] 实施例1[0020] 取还魂草lkg，利用超声波辅助提取法提取返魂草中绿原酸组分，提取温度为55°C，提取时间为60分钟，乙醇浓度为35%，料液比为1:40，超声功率为250W，超声波频率为55kHz，提取液减压浓缩至浸膏水溶液状态，得绿原酸浸膏水溶液。加入乙醇除杂，乙醇加入量与绿原酸浸膏水溶液的体积比为3:1，醇沉静置时间为4小时，醇沉温度为4°C。旋转蒸发去除乙醇，加入乙酸乙酯进行萃取，再加入6%的硫酸铵固体用乙酸乙酯-乙醇91:9，vv作为萃取剂进行多次萃取。在乙酸乙酯-乙醇层按100ml:2g的比例加入活性炭，萃取液减压浓缩，得绿原酸粗品。用lmolLHCl溶液调整绿原酸粗品水溶液的pH值为2.5左右，过NKA-9型层析柱，洗脱液分别为10%、40%、70%乙醇水溶液。将分段收集到的上述解吸液在真空条件下浓缩干燥得其固体，再选用甲醇溶解该固体，降低温度，待其析出结晶。得到产品5.2g，利用反相高效液相色谱RP-HPLC测定，收率为87%，纯度为89.0%。[0021] 实施例2[0022] 取还魂草lkg，利用超声波辅助提取法提取返魂草中绿原酸组分，提取温度为60°C，提取时间为90分钟，乙醇浓度为40%，料液比为1:45，超声功率为300W，超声波频率为60kHz，提取液减压浓缩至浸膏水溶液状态，得绿原酸浸膏水溶液。加入乙醇除杂，乙醇加入量与绿原酸浸膏水溶液的体积比为5:1，醇沉静置时间为6小时，醇沉温度为18°C。旋转蒸发去除乙醇，加入乙酸乙酯进行萃取，再加入8%的硫酸铵固体用乙酸乙酯-乙醇91:9，vv作为萃取剂进行多次萃取。在乙酸乙酯-乙醇层按100ml:3g的比例加入活性炭，萃取液减压浓缩，得绿原酸粗品。用lmolLHCl溶液调整绿原酸粗品水溶液的pH值为3.0左右，过NKA-9型层析柱，洗脱液分别为20%、50%、80%乙醇水溶液。将分段收集到的上述解吸液在真空条件下浓缩干燥得其固体，再选用甲醇溶解该固体，降低温度，待其析出结晶。得到产品5.5g，利用反相高效液相色谱RP-HPLC测定，收率为92%，纯度为91.0%。[0023] 实施例3[0024] 取还魂草lkg，利用超声波辅助提取法提取返魂草中绿原酸组分，提取温度为65°C，提取时间为120分钟，乙醇浓度为45%，料液比为1:45，超声功率为350W，超声波频率为65kHz，提取液减压浓缩至浸膏水溶液状态，得绿原酸浸膏水溶液。加入乙醇除杂，乙醇加入量与绿原酸浸膏水溶液的体积比为8:1，醇沉静置时间为8小时，醇沉温度为25°C。旋转蒸发去除乙醇，加入乙酸乙酯进行萃取，再加入1%的硫酸铵固体用乙酸乙酯-乙醇91:9，vv作为萃取剂进行多次萃取。在乙酸乙酯-乙醇层按100ml:4g的比例加入活性炭，萃取液减压浓缩，得绿原酸粗品。用lmolLHCl溶液调整绿原酸粗品水溶液的pH值为3.5左右，过NKA-9型层析柱，洗脱液分别为30%、60%、90%乙醇水溶液。将分段收集到的上述解吸液在真空条件下浓缩干燥得其固体，再选用甲醇溶解该固体，降低温度，待其析出结晶。得到产品5.3g，利用反相高效液相色谱RP-HPLC测定，收率为89%，纯度为90.0%。

权利要求：1.一种由返魂草提取和制备绿原酸的方法，其包括下列步骤:I提取:利用超声波辅助提取法提取返魂草中绿原酸组分，提取温度为60°c，提取时间为60分钟，乙醇浓度为40%，料液比为I:45，超声波功率为300W，超声波频率为60kHz。提取液减压浓缩至浸膏水溶液状态，得绿原酸浸膏水溶液；⑵乙醇除杂:将绿原酸浸膏水溶液中加入乙醇，醇沉后过滤，得滤液；3多次萃取:将醇沉除杂后所得滤液旋转蒸发去除乙醇，剩余溶液中加入乙酸乙酯进行萃取，然后再在绿原酸浸膏水溶液中加入8%的硫酸铵固体用乙酸乙酯-乙醇91:9，vv作为萃取剂进行多次萃取；⑷活性炭除杂:在乙酸乙酯-乙醇层加入一定量活性炭；5减压浓缩:萃取液再经减压浓缩，旋蒸温度在40〜80°C，10〜400mmHg压力的条件下进行浓缩，回收有机溶剂，得绿原酸粗品；6柱层析:将上述绿原酸粗品制成水溶液，改变溶液的pH值，过装有吸附材料的层析柱，随后用不同浓度的洗脱液进行洗脱，分段收集解吸液，洗脱液为乙醇溶液，浓度为10〜90%；7重结晶、干燥:将分段收集到的上述解吸液在真空条件下浓缩干燥得其固体，再选用甲醇溶解该固体，降低温度，待其析出结晶；⑶检测步骤:利用反相高效液相色谱RP-HPLC测定返魂草中绿原酸含量。2.根据权利要求1所述的一种由返魂草提取和制备绿原酸的方法，其特征在于:所述步骤2中，乙醇加入量与绿原酸浸膏水溶液的体积比为3〜8:1，醇沉静置时间为4〜8小时，醇沉温度为4〜25°C。3.根据权利要求1所述的一种由返魂草提取和制备绿原酸的方法，其特征在于:所述步骤4中，活性炭加入比例为100ml:3g。4.根据权利要求1所述的一种由返魂草提取和制备绿原酸的方法，其特征在于;所述步骤6中，用lmolLHCl溶液调整绿原酸粗品水溶液的pH值为3.0左右，层析柱中填料的型号为NKA-9，洗脱液为不同浓度的乙醇水溶液。5.根据权利要求1所述的一种由返魂草提取和制备绿原酸的方法，其特征在于:所述步骤⑶中，利用反相高效液相色谱RP-HPLC测定返魂草中绿原酸含量的方法为:绿原酸标准品和待检样品均用50%甲醇溶液溶解并定容,EclipseXDB-Cl8150mmX4.6mm，5um色谱柱，乙腈-0.4%磷酸12:88，VV为流动相，柱温:室温，检测波长为327nm，流速:ImLmin，进样量20uL。

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