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申请/专利权人：约翰霍普金斯大学;马里兰大学巴尔的摩分校

摘要：本发明公开的主题涉及与哺乳动物KCNK9钾通道的细胞外结构域的至少一个表位特异性结合和或相互作用的抗体、抗体片段或其衍生物，并涉及编码所述抗体、抗体片段或其衍生物的核酸分子，以及包含所述核酸分子的载体。本发明公开的主题提供了用于制备所述抗体、抗体片段或其衍生物的方法，以及包含所述抗体、抗体片段或其衍生物的药物组合物、诊断组合物和试剂盒。还提供了用于评价表达KCNK9的细胞的存在、抑制细胞中的KCNK9活性、抑制表达KCNK9的细胞例如，癌细胞的生长或存活、抑制肿瘤的生长和或转移、刺激补体依赖性癌细胞的细胞毒性和治疗癌症的抗体、抗体片段或其衍生物的组合物、试剂盒、方法和用途。

主权项：1.一种分离的抗体、抗体片段或其衍生物，所述分离的抗体、抗体片段或其衍生物与KCNK9钾通道的细胞外结构域的至少一个表位特异性结合。

全文数据：靶向钾通道KCNK9的新的单克隆抗体抑制剂[0001]相关申请的交叉引用[0002]本申请要求2015年3月18日提交的美国临时申请第62134,724号和2015年6月30日提交的美国临时申请第62186，772号的权益，这些申请的内容通过引用以其整体并入本文。[0003]联邦政府资助的研究或开发[0004]本发明根据由美国国立卫生研究院（theNationalInstitutesofHealthNIH授予的U54MH084691在政府支持下进行。政府在本发明中具有一定权利。[0005]通过引用并入的电子提交的材料[0006]本申请包含序列表。该序列表已作为名称为“111232-00498_ST25.txt”的ASCII文本文件经EFS-Web以电子形式提交。该序列表大小为20，480字节，且创建日期为2016年3月15日。该序列表在此通过引用以其整体并入。[0007]背景[0008]在所有生物体中，离子通道控制促进跨越细胞膜的离子通过的门（portal。离子分布的瞬时变化改变膜电位，这形成多种生物学过程的基础。钾K+通道为最丰富和多样化的离子通道（SunLi2013ActaPharmacolSin34,199-204。其中，双孔结构域K+K2P通道为最新的成员。迄今，已经发现了15种哺乳动物的K2P通道亚型（图lA;EnyediCzirjak,2010PhysiologicalReviews90,559-605，并且每一种亚型在生理过程和疾病（包括精神发育迟滞、家族性偏头痛和癌症）中均发挥不同的作用（EnyediCzirjak，2010PhysiologicalReviews90,559_605;Barel等（2008TheAmericanJournalofHumanGenetics83,193-199;Lafreniere等（2010NatMed16,1157-1160;Mu等（2003CancerCell3,297-302。尽管它们具有重要意义，但关于单独的K2P亚型获得的知识有限，这部分地由于K2P的高度同源的性质和亚型特异性工具的缺乏。[0009]KCNK9为K2P通道家族的成员。在生理条件下，KCNK9主要在中枢神经系统的组织诸如小脑）中表达，用于维持静息膜电位并调节动作电位启动EnyediCzirjak,2010PhysiologicalReviews90,559-605。基于遗传学证据，KCNK9也已经牵涉在癌症中，所述遗传学证据包括在人类乳腺肿瘤和肺肿瘤中的基因组扩增、mRNA和蛋白过表达（Mu等2003CancerCell3,297-302。已经证明强制的KCNK9表达促进裸小鼠中小鼠胚胎成纤维细胞的转化，这可能是通过改善在低氧或血清剥夺条件下的细胞存活进行的（Mu等2003CancerCell3,297_302;Pei等（2003ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences100,7803-7807。然而，由于KCNK9功能的特异性调节物的缺乏，内源KCNK9如何有助于赘生物及其作为治疗靶的潜力仍然难以捉摸。K2P通道的遗传研究由于发育和补偿作用而通常难以解释（Linden等（2008JournalofPharmacologyandExperimentalTherapeutics327,277-286。已经进行了小分子的高通量筛选以鉴定KCNK9的特异性调节物，但尽管如此，进展有限（Miller等（2012ProbeReportsfromtheNIHMolecularLibrariesProgram[Internet]。这部分地因为难以合理地设计化学筛选和开发针对共有高的序列和结构同源性的靶的小分子。因其精准的特异性而闻名的抗体已经被广泛用于靶向细胞表面受体和抗原，特别地如应用于癌症治疗ChanCarter2010NatRevImmunol10,301-316;Zhang等2007CellRes17,89-99。然而，使用抗体调节离子通道活性的可行性尚未得到良好的探索。[0010]K2P通道共有相当大的架构相似性。它们组装为二聚体，其中每一个亚基包含两个连锁的孔隙（pore-lining区域PI、P2和四个跨膜结构域M1-M4I2P通道的一个签名signature特征为在细胞外侧在Ml和Pl结构域MlPl之间的约60个氨基酸的环。人类K2P通道的晶体结构分析揭示了该环作为结构型结构域，其对细胞外离子途径“加帽”，这为K2P对常见通道阻滞剂的不敏感性提供了解释Fink等（1998EmboJ17,3297-3308;Lesage等1996EmboJ15,1004-1011。突变分析和嵌合体研究已经为MlPl在感测细胞外刺激和调节通道门控中的作用提供了强有力的证据（Clarke等（2008JournalofBiologicalChemistry283,16985-16992；Lotshaw2007CellBiochemistryandBiophysics47,209-256〇[0011]概述[0012]除非另有指示，否则本发明的实践通常将采用细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组核酸例如，DNA技术、免疫学和RNA干扰RNAi的常规技术，这在本领域的技术范围内。这些技术中的某些的非限制性描述可见于以下出版物：Ausubel，F.，等，（编著），CurrentProtocolsinMolecularBiology,CurrentProtocolsinImmunology,CurrentProtocolsinProteinSciencejPCurrentProtocolsinCellBiology，都是JohnWileySons的，N.Y.，为2008年12月版本；Sambrook、Russell、和Sambrook,MolecularCloning.ALaboratoryManual，第3版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor，2001;Harlow，E·和Lane，D·,Antibodies—ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,1988;Freshney，R.I·，“CultureofAnimalCells，AManualofBasicTechnique”，第5版，JohnWileySons,Hoboken，N.J.,2005。关于治疗剂和人类疾病的非限制性信息可见于Goodman和Gilman的ThePharmacologicalBasisofTherapeutics，第11版，McGrawHi11，2005，Katzung，B·编著）BasicandClinicalPharmacology,McGraw-Hi11AppletonLange第10版2006或第11版2009年7月）。关于基因和遗传紊乱的非限制性信息可见于McKusick,V.A.:MendelianInheritanceinMan.ACatalogofHumanGenesandGeneticDisorders.Baltimore:JohnsHopkinsUniversityPress，1998第12版）或最近的在线数据库：〇nlineMendelianInheritanceinMan,0MIM™.McKusick-NathansInstituteofGeneticMedicine,JohnsHopkinsUniversityBaltimore,Md.和美国国家生物技术信息中心（NationalCenterforBiotechnologyInformation、美国国家医学图书馆NationalLibraryofMedicineBethesda,Md.，自2010年5月I日起，万维网WorldWideWebURL:http:www.ncbi.nlm.nih.govomim以及可见于http:omia.angis.org.aucontact.shtmlOnlineMendelianInheritanceinAnimalsOMIA中，一种动物物种除了人类和小鼠以外）中的基因、遗传性紊乱和性状的数据库。本文提及的所有专利、专利申请和其他出版物例如，科学文章（scientificarticles、书籍、网站和数据库通过引用以其整体并入本文。如果说明书和任何并入的参考文献之间存在冲突，则以说明书包括其可能基于并入的参考文献的任何修改为准。除非另有指示，否则本文使用术语的标准的领域公认的含义。本文使用多种术语的标准缩写。[0013]在一个方面，本发明公开的主题提供了一种分离的抗体、抗体片段或其衍生物，所述分离的抗体、抗体片段或其衍生物与KCNK9钾通道的细胞外结构域的至少一个表位特异性结合。在一些实施方案中，本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物不与其他钾通道结合。在一些实施方案中，本发明公开的抗体包括单克隆抗体。在一些实施方案中，本发明公开的抗体包括人源化抗体例如，人源化单克隆抗体）。[0014]在一个方面，本发明公开的主题提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物。[0015]在一个方面，本发明公开的主题提供了一种诊断组合物，所述诊断组合物包含本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物。[0016]在一个方面，本发明公开的主题提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物。[0017]在一个方面，本发明公开的主题提供了一种评价表达KCNK9的细胞的存在的方法，所述方法包括使疑似在其表面上表达KCNK9的细胞或组织与本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物或者与本发明公开的诊断组合物接触。[0018]在一个方面，本发明公开的主题提供了一种抑制KCNK9活性的方法，所述方法包括使在其表面上表达KCNK9的细胞或组织与本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物或者与本发明公开的药物组合物接触。[0019]在一个方面，本发明公开的主题提供了一种抑制表达KCNK9的癌细胞的生长或存活的方法，所述方法包括使在其表面上表达KCNK9的癌细胞与本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物或者与本发明公开的药物组合物接触。[0020]在一个方面，本发明公开的主题提供了一种抑制患有或疑似患有癌症的受试者中的肿瘤的生长和或转移的方法，所述方法包括将本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物或者本发明公开的药物组合物以有效抑制受试者中的肿瘤的生长和或转移的量施用至受试者。[0021]在一个方面，本发明公开的主题提供了一种刺激患有或疑似患有癌症的受试者中的补体依赖性癌细胞的细胞毒性的方法，所述方法包括将本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物或者本发明公开的药物组合物以有效刺激受试者中的补体依赖性癌细胞的细胞毒性的量施用至受试者。[0022]在一个方面，本发明公开的主题提供了一种用于治疗有相应需要的受试者中表达KCNK9的癌症的方法，所述方法包括将本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物或者本发明公开的药物组合物以有效治疗受试者中表达KCNK9的癌症的量施用至受试者。[0023]上文已陈述了本发明公开的主题的某些方面，其全部或部分地由本发明公开的主题处理，当结合如下文最充分描述的所附实施例和附图考虑时，随着描述的进行其他方面将变得明显。[0024]附图简述[0025]如此，已经概括地描述了本发明公开的主题，现将参考附图，其不一定按比例绘制，并且其中：[0026]图1A、图1B、图IC和图ID示出了靶、表位和抗原的特征。图IA示出了由15个人类通道孔结构域1序列的序列比对计算的K2P系统发育树。基于序列相似性和功能相似性，可以将通道分为六个亚家族。图IB示出了通过基于hKCNK4晶体结构的同源建模预测的hKCNK9的3D结构。由抗体靶向的MlPl结构域着蓝色。注释了MlPl结构域内为门控所必需的残基。图IC示出了对应于15个hK2P亚型的MlPl结构域的序列比对。选择用于抗体产生的MlPl结构域着蓝色。计算hKCNK9和其他K2P亚型的MlPl结构域之间相同残基的成对百分比。图ID示出了重组抗原-hGH-hK9MlP1和hK9MlPI-mlgG的示意图。[0027]图2A和图2B示出了用于mAb开发所产生的抗原。图2A示出了，hGH-K9MlPl和K9MlPl-mIgG抗原（〜37kDa表达由蛋白印迹验证载体:25kDa。图2B示出了用于评价抗原纯度的银染；[0028]图3A、图3B、图3C和图3D示出了Y4以亚型特异性和高亲和力与hKCNK9结合。图3A示出了用Y4和抗-hGH抗体印迹的hGH-K2PMlPl重组蛋白的蛋白印迹分析。图3B示出了瞬时表达hKCNK9或hKCNK3的HEK293细胞的流式细胞术分析，其首先用mAb染色、然后用第二APC缀合的山羊抗小鼠IgG抗体进行复染。图3C示出了由Octet平台确定的Yl-4mAb的结合动力学。缔合和解离速率通过在hGH-hK9MlPl或hGH-mK9MlPl重组蛋白的存在下孵育用Yl-4mAb包被的探针来实时测量。图3D示出了通过重组蛋白的蛋白印迹确认的Yl-4mAb对人类与鼠murineKCNK9的差异亲和力以及瞬时表达hKCNK9或mKCNK9的HEK293细胞的流式细胞术分析；[0029]图4示出了相比于hKCNK3，Y-mAb对hKCNK9的优先结合。进行了Y-mAb针对hGH-hKCNK3和hKCNK9-碱性磷酸酶重组蛋白的蛋白印迹分析。抗-hGH和非特异性mlgGl抗体用作对照；[0030]图5示出了Y-HiAb结合的实时测量。缔合k〇n和解离koff常数通过Octet平台来测量，以确定mAb与hKCNK9MlPl或mKCNK9MlPl结合的亲和力；[0031]图6A、图6B、图6C、图6D、图6E和图6F示出了Y4通过诱导通道从细胞表面内化而抑制hKCNK9。图6A示出了基于铊ΤΓ的荧光测定原理（Invitrogen的示意图和读出。765和966为用作对照化合物的化学调节物。图6B示出了在四环素Tet诱导的存在Tet+或不存在（TeO下用Yl和Y4mAb染色的Tet诱导型hKCNK9稳定细胞系的流式细胞术分析。亲本HEK293细胞用作阴性对照。图6C示出了通过以0.4mgml应用的Y4对TΓ电导的时间依赖性抑制。将Tet+细胞用Y4、YlmAb或PBS处理0.5-48小时，随后进行ΤΓ测定，并且与未处理的细胞进行比较。在时间点0时的ΤΓ电导的差异用于比较。图6D示出了来自处理1小时、6小时或36小时的Tet+实线和Tef虚线细胞的作为随时间的荧光变化作图的代表性ΤΓ迹线。示出的所有数据均为平均值土标准偏差，η=24，*p〈0.0001。图6E示出了通过Y4对ΤΓ电导的浓度依赖性抑制。将Tet+细胞用0.4mgml或0.04mgml的Y4和Yl处理12-48小时，随后进行ΤΓ测定。示出的所有数据均为平均值土标准偏差，11=6，叶〈0.01。图6?示出了通过¥4诱导的hKCNK9从细胞表面的内化。将瞬时表达hKCNK9和mcherry或RFP加标签的EEAl的⑶S-7细胞与Alexa488缀合的Y4在4°C孵育3小时或在30°C孵育12小时。通过比较分析了瞬时表达hKCNK3和mcherry的细胞。细胞核用DAPI复染。Alexa488缀合的Y4和RFP加标签的EEAl之间的共定位使用Imaris软件分析。统计分析基于皮尔逊相关系数Pearson’scorrelationcoefficientr0.5为显著的）。比例尺Bar:20μηι;[0032]图7Α、图7Β和图7C示出了mAb介导的hKCNK9的抑制不是由于细胞通道数目的变化而是由于通道活性的变化。图7A示出了适用于mAb筛选的Tl+测定的概要图（outline。图7B示出了，在¥2、!18、!110、!114和!13〇11^13的36小时处理后的代表性11+迹线也显示出抑制。图7〇示出了，在指定时间段的mAb孵育后，在时间0时的荧光未显示出显著的差异，表明细胞数目没有明显的差异；[0033]图8示出了来自Y4时间过程实验的代表性TΓ迹线。将来自处理0.5-24小时的Tet+和Tef细胞的代表性ΤΓ迹线作为随时间的荧光变化作图；[0034]图9A和图9B示出了Y4在电生理记录中显示出无显著的急性效应。图9A示出了用于检查Y4对hKCNK9的急性效应的电生理膜片钳记录方案。图9B示出了在Y4的存在下hKCNK9通道电导的定量。MlPl结构域参与通过hKCNK9的pH感测。将两种不同的pH条件用于查明Y4与MlPl结构域结合是否改变hKCNK9对细胞外pH的敏感性；[0035]图10A、图IOB和图IOC示出了Y4减少在细胞表面上表达的hKCNK9通道的数目。图IOA示出了，设置以检查在Y-mAb孵育之后在细胞表面上保留的hKCNK9的染色和流式细胞术分析的概要图。图IOB示出了染色为hKCNK9阳性的细胞的绝对百分比的变化的概述。图IOC示出了显示hKCNK9染色的代表性直方图，其显示平均荧光强度的显著左移降低）；[0036]图IlA和图IlB示出了Y4与Alexa488的缀合不改变细胞表面抗原的结合亲和力。图IlA示出了Y4缀合Lifetechnologies的示意图。图IlB示出了用指定稀释的未标记的Y4或Alexa488标记的Y4随后用APC标记的抗-mlgG第二抗体染色的Tet诱导的hKCNK9稳定细胞系和流式细胞术分析。将K9+细胞的百分比随着mAb剂量作图；[0037]图12A、图12B、图12C、图12D和图12E示出了Y4抑制具有KCNK9高表达的癌细胞的存活。图12A示出了患有与hKCNK9或hKCNK3基因表达水平（比平均值高或低两倍相关的鳞状细胞肺癌和乳腺癌的患者的存活的Kaplan-Meier曲线。数据集来自出版的研究（vandeVijver等（2002NewEnglandJournalofMedicine347,1999_2009;Bild等（2006Nature439,353-357。患者的基因表达数据和临床数据进行手动匹配，并且仅具有有效基因表达数据和临床数据二者的患者才被包括用于分析。*P〈〇.05,基于对数秩Mantel-Cox检验Log-rankMantel-Coxtest。图12B示出了如通过流式细胞术和蛋白印迹分析验证的，Y4检测在癌细胞系中表达的内源KCNK9的能力。图12C示出了基于DNA含量的K9+和Κ9ΈΕΝ细胞的细胞周期分析。GoAh:2N，S:2N〜4N，G2M:4N。图12D示出了Y4降低表达KCNK9的癌细胞系的细胞存活力并增加其细胞死亡。将根据hKCNK9表达水平K9+或KT分选的BEN细胞、81'-549细胞、10^-1©-231细胞、1^22和410.4细胞在10%血清或0.1%血清的存在下用0.4mgmlmlgGl或Y4处理24-72小时。示出的所有数据为平均值土标准偏差，n=6，*p〈0.01，0.1%热灭活HI血清;#p〈0.01，0.1%和10%血清，双尾学生t-检验。图12E示出了Y4活化补体，导致体外补体依赖性癌细胞的细胞毒性。将K9+分选的BEN细胞和BT-549细胞在0.4mgmlmlgGl或Υ4的存在下用正常或热灭活的鼠补体处理3小时，随后进行LDH测量。示出的所有数据均为平均值土标准偏差，η=6，*p〈0.05;[0038]图13A和图13B示出了人类和鼠癌细胞系中的KCNK9表达。图13A示出了通过qRT-PCR和流式细胞术分析验证的hKCNK9表达。图13B示出了通过qRT-PCR和蛋白印迹分析验证的mKCNK9表达。密度测定法Densitometry定量在印迹下方示出。66.1、4T1、410.4为鼠转移性乳腺癌细胞系;67和410为鼠非转移性细胞系;ΕρΗ4为鼠正常的乳腺细胞系；[0039]图14示出了Κ9_ΒΕΝ细胞在体外传代后是稳定的。将BEN和ΒΤ-549细胞基于hKCNK9表达进行FACS分选，产生PlK9+细胞和P2KT细胞。在体外被传代三次之后，将它们染色并通过流式细胞术分析；[0040]图15A、图15B、图15C、图15D、图15E、图15F、图15G、图15H、图151、图15J、图15K、图15L、图15M和图15N示出了全身性Y4抑制了BEN细胞在免疫缺陷小鼠中繁殖皮下肿瘤异种移植物的能力。图15A示出了持续22天一周两次用I3BSi.p.注射到N0DSCID小鼠中的4mgkgmlgGl或Y4处理的BEN植入物engraftment的生长曲线，（η=10，*p〈0·01。在细胞注射的同一天，mAb处理开始，以监测mAb在早期肿瘤建立期间的作用。代表性照片显示肿瘤虚线）在第22天在N0DSCID小鼠中形成。图15B示出了用mlgGl或Y4处理的小鼠的体重η=10。图15C示出了mlgGl或Υ4处理组中Ki67+细胞的定量确定和显示Ki67染色的肿瘤横截面的代表性照片。图15D示出了mlgGl或Y4处理组中裂解的胱天蛋白酶-3+细胞的定量确定和显示裂解的态胱天蛋白酶-3染色的肿瘤横截面的代表性照片。示出的所有数据均为平均值±标准偏差，n=30，*p〈0.01。图15E示出了mIgGl或Y4处理组中hKCNK9的定量确定和具有Y4的肿瘤组织的代表性蛋白印迹。示出的所有数据均为平均值土标准偏差，11=1〇，吨〈〇.〇5。图15卩示出了持续14天一周两次用PBSi.p.注射到N0DSCID小鼠中的4mgkgmlgGl或Y4处理的BEN植入物的生长曲线，（n=10，*p〈0.01。在第8天在肿瘤为可测量之后，mAb处理开始。代表性照片显示肿瘤虚线在第22天在N0DSCID小鼠中形成。图15G示出了用mlgGl或Y4处理的小鼠的体重n=10。图15H示出了mlgGl或Y4处理组中Ki67+细胞的定量确定和显示Ki67染色的肿瘤横截面的代表性照片。图151示出了mlgGl或Y4处理组中裂解的胱天蛋白酶-3+细胞的定量确定和显示裂解的胱天蛋白酶-3染色的肿瘤横截面的代表性照片。示出的所有数据均为平均值土标准偏差，11=30，吨〈0.01。图151示出了1111861或¥4处理组中11此疆9的定量确定和具有Y4的肿瘤组织的代表性蛋白印迹。示出的所有数据均为平均值土标准偏差，η=10，邙〈0.05。图151示出了持续15天一周两次用11^61或¥4丨.？处理的吧6小鼠中的1^22患者来源的异种移植物PDX植入物的生长曲线。平均值土s.e.m.，η=10组，*P〈0.01，双尾学生t-检验。图15L示出了Ki67+细胞的定量确定和肿瘤横截面的代表性染色。平均值±标准偏差，η=30组，*P〈0.05，双尾学生t-检验；比例尺，1，ΟΟΟμπι。图15M示出了裂解的胱天蛋白酶-3+细胞的定量确定和肿瘤横截面的代表性染色。平均值土标准偏差，η=30组；比例尺，1，ΟΟΟμπι。图15Ν示出了hKCNK9的定量确定和肿瘤组织的代表性蛋白印迹。平均值土标准偏差，η=10组，*P〈0.05，双尾学生t-检验；[0041]图16A、图16B、图16C和图16D示出了Y4在免疫活性小鼠中抑制410.4细胞的肺转移并活化免疫应答。图16A示出了一周两次用PBSi.p.注射的4mgkgmlgGl或Y4处理的BALBcByJ小鼠中的肺转移病灶的数目（η=10，*p〈0.01。图16B示出了通过从mlgGl或Y4处理的小鼠的肺组织提取的mRNA的qRT-PCR验证的免疫标志物的表达n=5，*p〈0.05。图16C示出了Y4活化补体，导致体外补体依赖性细胞毒性。将K9+BEN细胞和BT-549细胞在正常或热灭活的鼠补体的存在下用Y4处理2小时，随后进行LDH测量。平均值土标准偏差，η=6，*P〈0.05，双尾学生t-检验。图16D示出了Υ4活化ADCC报告物细胞。将BEN细胞与不同剂量的Υ4和mlgGl和稳定表达FCγRIII和驱动萤光素酶表达的NFAT响应元件NFAT-RE-luc2的工程化的鼠JurkatT细胞一起孵育。测量的萤光素酶活性指示ADCC诱导。平均值±标准偏差，η=3，*Ρ〈0.01，双尾学生t-检验；以及[0042]图17A和图17B示出了使用mAbH23图17A和H28图17B的细胞存活力测定。[0043]本专利或申请文件包含以彩色方式执行的至少一个附图。带有彩色附图的本专利或专利申请公布的副本将在请求并支付必要的费用后由美国专利局Office提供。[0044]详述[0045]本发明公开的主题涉及与哺乳动物KCNK9钾通道的细胞外结构域的至少一个表位特异性结合和或相互作用的抗体、抗体片段或其衍生物，和编码所述抗体、抗体片段或其衍生物的核酸分子，以及包含所述核酸分子的载体。本发明公开的主题提供了用于制备所述抗体、抗体片段或其衍生物的方法，以及包含所述抗体、抗体片段或其衍生物的药物组合物。本发明公开的主题还提供了一种诊断组合物和试剂盒，所述诊断组合物和试剂盒包含抗体、抗体片段或其衍生物。在一些方面，本发明公开的主题提供了一种用于评价表达KCNK9的细胞的存在的方法。在某些方面，本发明公开的主题提供了抑制细胞中KCNK9活性的方法。在一些方面，本发明公开的主题提供了抑制表达KCNK9的细胞例如，癌细胞）的生长或存活的方法。在其他方面，本发明公开的主题涉及抗体、抗体片段或其衍生物在用于抑制肿瘤的生长和或转移、刺激补体依赖性癌细胞的细胞毒性的方法以及用于治疗癌症例如，表达KCNK9的癌症的相关方法中的用途。[0046]现在将在下文中参照附图更全面地描述本发明公开的主题，在附图中示出本发明的某些但不是所有的实施方案。相似的数字自始至终指相似的元件。本发明公开的主题可以以许多不同的形式体现并且不应被解释为限于本文提出的实施方案;更确切地说，这些实施方案被提供以使得本公开内容将满足可适用的法律要求。事实上，本文提出的本发明公开的主题的许多修改和其他实施方案将被在本发明公开的主题所属领域中的技术人员所想到，具有在前面的描述和相关的附图中呈现的教导的益处。因此，应当理解，本发明公开的主题不应被限于所公开的具体实施方案并且所述修改和其他实施方案意图被包括在所附权利要求的范围内。[0047]钾通道普遍存在于细胞中。对于此一个原因应该是，通道参与细胞静息电位的调节，这被认为是其主要作用。然而，鉴于不同细胞类型中的通道的普遍存在，已经假定它们也可能参与更一般的功能，诸如“持家housekeeping”功能。特别地，实验证据表明它们牵涉在细胞分裂周期中[Ouadid-AhidouchH等，2001]，暗示了它们可能参与癌症发生cancerogenesis。事实上，基于遗传学证据，KCNK9已经牵涉在癌症中，所述遗传学证据包括在人类乳腺肿瘤和肺肿瘤中的基因组扩增、mRNA和蛋白过表达Mu等2003CancerCell3，297-302。由于此类通道也在各种细胞类型，特别是在分裂的细胞，包括癌细胞，诸如赘生性细胞中表达，医学非常感兴趣的是提供可用于与钾通道相关的治疗和或诊断应用中的工具。[0048]目前，不存在特异性识别hKCNK9细胞外结构域的单克隆抗体。类似地，不存在有效抑制KCNK9生物学功能的亚型特异性药理学剂。为了进一步扩展诊断和或治疗应用，期望具有特异性区分哺乳动物，特别是人类KCNK9与其他双孔结构域钾（K2P通道亚型诸如KCNK3在K2P成员中与KCNK9最密切相关）的抗体。[0049]因此，本发明公开的主题潜在的技术问题为提供可用于进一步特定研究、诊断、预防和治疗与来自不同哺乳动物物种的KCNK9活性且特别是hKCNK9活性相关的缺陷和或疾病的此类抗体。[0050]所述技术问题的解决方案通过提供本发明公开的主题，包括权利要求中所描述特性的实施方案来实现。[0051]因此，本发明公开的主题提供了一种抗体、抗体片段或其衍生物，所述抗体、抗体片段或其衍生物与KCNK9钾通道的细胞外结构域的至少一个表位特异性结合。在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物不与其他钾通道结合，其他钾通道诸如K2P家族成员KCNKI、KCNK2、KCNK3、KCNM、KCNK5、KCNK6、KCNK7、KCNK8、KCNK10、KCNK11、KCNK12、KCNK13、KCNK14和KCNK15。在一些实施方案中，至少一个表位包含MlPl结构域。如本文使用的，“M1P1结构域”指位于KCNK9的Ml结构域和Pl结构域之间的哺乳动物KCNK9的第一细胞外结构域氨基酸30〜88。在一些实施方案中，至少一个表位包括人类钾通道亚家族K成员KCNK9hKCNK9蛋白（SEQIDN0:1的氨基酸Glu3Q和Ile88之间的表位。[0052]MKRQNVRTLSLIVCTFTYLLVGAAVFDALESDHEMREEEKLKAEEIRIKGKYNISSEDYRQLELVILQSEPHRAGVQWKFAGSFYFAITVITTIGYGHAAPGTDAGKAFCMFYAVLGIPLTLVMFQSLGERMNTFVRYLLKRIKKCCGMRNTDVSMENMVTVGFFSCMGTLCIGAAAFSQCEEWSFFHAYYYCFITLTTIGFGDYVALQTKGALQKKPLYVAFSFMYILVGLTVIGAFLNLVVLRFLTMNSEDERRDAEERASLAGNRNSMVIHIPEEPRPSRPRYKADVPDLQSVCSCTCYRSQDYGGRSVAPQNSFSAKLAPHYFHSISYKIEEISPSTLKNSLFPSPISSISPGLHSFTDHQRLMKRRKSVSEQIDN0：D[0053]在一些实施方案中，至少一个表位包括与SEQIDNO:1至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%相同的表位。[0054]在蛋白或多肽的上下文中的“序列同一性”或“同一性”指当在指定的比较窗上实现最大一致的比对时两个氨基酸序列中相同的氨基酸残基。因此，“序列同一性百分比”指通过在比较窗上比较两个最佳比对的序列确定的值，其中为了两条序列的最佳比对，氨基酸序列在比较窗中的部分与参考序列（其不包括添加或缺失）相比可以包括添加或缺失即，缺口）。百分比如下计算，通过确定两个序列中出现相同的氨基酸残基的位置的数目，以产生匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗中位置的总数目，并将结果乘以100以得到序列同一性的百分比。序列同一性百分比的有用实例包括，但不限于，50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或95%、或从50%至100%的任何整数百分比。这些同一性可以使用本文描述的任何程序来确定。[0055]序列比对和同一性百分比或相似性计算可以使用被设计为检测同源序列的多种比较方法来确定，多种比较方法包括，但不限于，LASERGENE生物信息学计算套件中的MegAlign™程序DNASTARInc.，Madison，Wis.。应当理解，除非另有规定，在本申请的上下文内，当序列分析软件用于分析时，分析的结果将基于提及的程序的“缺省值”。如本文使用的，“缺省值”将意指当首次初始化时软件最初装载的值或参数的任何集合。“ClustalV比对方法”对应于被标为ClustalV的比对方法（由以下描述的：Higgins和Sharp1989CABIOS5:151-153;Higgins等（1992Comput.Appl.Biosci.8:189-191并见于LASERGENE生物信息学计算套件中的MegAlign™程序DNASTARInc.，Madison，Wis.〇[0056]本领域技术人员应当理解，许多水平的序列同一性可用于鉴定蛋白或多肽例如，来自其他物种），其中蛋白或多肽具有相同或相似的功能或活性。同一性百分比的有用实例包括，但不限于，50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或95%、或从50%至100%的任何整数百分比。事实上，从50%至100%的任何整数氨基酸同一性可用于描述本发明公开的主题，诸如51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。[0057]本发明公开的抗体在其结合特异性和生物学活性方面表现出有利的特性。例如，本发明公开的主题表明，抗体不仅识别人类KCNK9钾通道，而且能够识别其他哺乳动物物种的KCNK9钾通道诸如小鼠KCNK9。在一些实施方案中，本发明公开的抗体表现出以下一个或更多个特征：[0058]•与细胞外孔结构域中的3维或线性表位结合与细胞外结构域结合；[0059]•以高亲和力结合;和或[0060]•以高特异性结合。[0061]因此，本发明公开的抗体具有这样的优势：它们可以用于在宽范围的实验动物以及人类组织中特异性检测KCNK9。因此可以减小产生识别不同物种中的KCNK9的抗体的成本。[0062]本发明公开的主题的抗体允许在体外和体内两者特异性识别哺乳动物KCNK9钾通道。[0063]在一些实施方案中，本发明公开的KCNK9抗体表现出以下一个或更多个特征：[0064]•抑制K+通道介导的电流；[0065]•导致离子通道的内化和胞吞；[0066]•干扰离子通道的亚基组装；[0067]•减少第二信使的释放或活化；[0068]•减少或抑制细胞生长；[0069]•增加细胞死亡和或[0070]•干扰离子通道同多聚体异多聚体hom〇-heteromultimers的形成。[0071]在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物抑制KCNK9活性。在本文使用的一些情况下，“KCNK9活性”指钾通道电导。如本文使用的，术语“降低”或“抑制”及其语法变形指剂阻断、部分地阻断、干扰、减少、降低生物分子、途径或作用机制或使其失去活性的能力。因此，本领域普通技术人员将理解，术语“抑制”包括活性的完全和或部分损失，例如，活性损失了至少10%，在一些实施方案中，活性损失了至少20%、至少30%、至少50%、至少75%、至少95%、至少98%、以及多达并包括100%。在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物抑制KCNK9介导的钾通道电导多达10%、多达20%、多达30%、多达40%、多达50%或更多。在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物抑制KCNK9介导的钾通道电导多达60%、多达70%、多达80%、多达90%、多达95%或更多。在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物完全抑制细胞中KCNK9介导的钾通道电导。[0072]在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物与表达KCNK9的细胞的表面上的至少一个表位的结合引起细胞的表面上的钾通道的内化和胞吞。即，在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物能够引起表达KCNK9的细胞中KCNK9钾通道的内化。在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物与表达KCNK9的细胞的表面上的至少一个表位的结合抑制表达KCNK9的细胞的存活。在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物抑制细胞群体诸如肿瘤）中表达KCNK9的细胞的存活。在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物抑制块状bulk肿瘤例如，乳腺肿瘤、肺肿瘤等）中至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、或至少75%的表达KCNK9的细胞的存活。在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物抑制块状肿瘤（例如，乳腺肿瘤、肺肿瘤等）中至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的表达KCNK9的细胞的存活。在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物抑制块状肿瘤例如，乳腺肿瘤、肺肿瘤等）中所有表达KCNK9的细胞的存活。[0073]在一些实施方案中，已经在细胞表面上结合本发明公开的抗体的表达KCNK9的细胞被免疫系统功能诸如补体系统或细胞介导的细胞毒性攻击。在一些实施方案中，表达KCNK9的细胞包括癌细胞。在一些实施方案中，表达KCNK9的细胞包括乳腺癌细胞。在一些实施方案中，表达KCNK9的细胞包括肺癌细胞。在一些实施方案中，表达KCNK9的细胞从罹患小细胞肺癌的受试者获得。在一些实施方案中，表达KCNK9的细胞从罹患非小细胞肺癌的受试者获得。[0074]本发明公开的抗体在其结合特异性和生物学活性方面，特别是在其识别多种哺乳动物中KCNK9钾通道表位并减少细胞生长的能力方面表现出有利的特性。由于本发明公开的抗体的药物应用和或诊断应用包括，但不限于人类，本发明公开的主题预期了人源化抗体以最小化潜在的负效免疫原性副作用用于在人类中使用。如本文使用的术语“人源化抗体”意图包括由非人类细胞制成的抗体，其具有被改变的可变区和恒定区以更接近地类似于由人类细胞产生的抗体。例如，通过改变非人类抗体氨基酸序列以掺入在人类种系免疫球蛋白序列中发现的氨基酸。本发明公开的主题的人源化抗体可以例如在CDR中包括不由人类种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基例如，通过体外随机或位点特异性诱变引入的突变或通过体内体细胞突变引入的突变）。如本文使用的术语“人源化抗体”还包括这样的抗体，其中来源于另一哺乳动物物种诸如小鼠的种系的CDR序列已经被接枝到人类框架序列上。[0075]在一些实施方案中，KCNK9钾通道包括人类KCNK9钾通道。在一些实施方案中，抗体为单克隆抗体。单克隆抗体可以例如通过如在Kohler和Milstein,Nature2561975,495，以及Galfre，Meth.Enzymol.731981，3中最初描述的充分建立的技术来制备，其包括小鼠骨髓瘤细胞与来源于用本领域开发的修饰免疫接种的哺乳动物的脾细胞的融合。[0076]在一些实施方案中，抗体为人源化单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体为Y4。[0077]在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物与哺乳动物KCNK9钾通道的细胞外结构域的至少一个表位特异性结合和或相互作用，并且不与哺乳动物KCNK3钾通道结合和或相互作用。在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物与人类KCNK9钾通道的细胞外结构域的至少一个表位特异性结合和或相互作用，并且不与人类KCNK3钾通道结合和或相互作用。如本文使用的，术语“细胞外结构域”为本领域熟知的术语，并且指KCNK9钾通道延伸进入细胞外环境的部分。该结构域包括哺乳动物KCNK9分子的氨基酸30-88,以及其他。[0078]在一些实施方案中，抗体片段或其衍生物为Fab片段、Fab2'片段、单链抗体、嵌合抗体、CDR接枝抗体、二价抗体构建体、人源化抗体、人类合成抗体或其化学修饰的衍生物、多特异性抗体、双抗体、Fv片段或另一类型的重组抗体。[0079]本发明公开的针对KCNK9细胞外结构域的至少一个表位的抗体的片段或衍生物可以通过使用例如在Harlow和Lane“Antibodies,ALaboratoryManual”，CSHPress,ColdSpringHarbor,1988中描述的方法来获得。当所述抗体的衍生物通过菌体展示技术获得时，如BIAcore系统中采用的表面等离子体共振可以用于增加与KCNK9细胞外结构域的至少一个表位结合的菌体抗体的效率Schier,HumanAntibodiesHybridomas71996,97-105;Malmborg，J.Immunol.Methods1831995，7_13。[0080]本发明公开的主题预期了使用核酸分子、载体和宿主细胞产生突变的KCNK9抗体。抗体可以在重链和或轻链的可变结构域中被突变以改变抗体的结合特性。例如，可以在一个或更多个CDR区域中进行突变以增加或减少抗体对KCNK9的KcU或以改变抗体的结合特异性。定点诱变技术为本领域熟知的。参见，例如，Sambrook等和Ausubel等，同上。此外，在已知与KCNK9抗体的可变区中的种系相比变化的氨基酸残基处进行突变。在另一个方面，核酸分子在一个或更多个框架区中被突变。可以在框架区或恒定结构域中进行突变以增加KCNK9抗体的半衰期。参见，例如，2000年2月24日公布的WO0009560。还可以在框架区或恒定结构域中进行突变以改变抗体的免疫原性，以提供与另一分子共价或非共价结合的位点，或以改变诸如补体固定的此类特性。在单个突变的抗体中可以在框架区、恒定结构域和可变区的每一个中进行突变。可选地，在单个突变的抗体中可以在框架区、可变区和恒定结构域的仅一个中进行突变。[0081]嵌合抗体的产生例如在W08909622中描述。用于产生人源化抗体的方法例如在EP-Al0239400和W09007861中描述。根据本发明将利用的另外的抗体来源为所谓的异种抗体。用于在小鼠中产生异种抗体诸如人类抗体的一般原理例如在WO9110741、W09402602、W09634096和WO9633735中描述。如以上讨论的，除了完整抗体以外，本发明公开的主题的抗体可以以多种形式存在;包括，例如，Fv、Fab和Fab2，以及单链;参见，例如，W08809344。[0082]在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物包含VH和Vl链的每一个的至少一个CDR0[0083]在一个实施方案中，用于在本发明公开的主题中使用的抗体为双特异性抗体。双特异性抗体在单个抗体多肽内具有两种不同抗原的结合位点。抗原结合可以是同时的或顺序的。Triomas和杂合-杂交瘤hybridhybridomas为可以分泌双特异性抗体的细胞系的两个实例。由杂合-杂交瘤或trioma产生的双特异性抗体的实例在美国专利第4，474，893号中公开。双特异性抗体已经通过以下来构建:化学方法（Staerz等（1985Nature314:628，和Perez等（1985Nature316:354和杂交瘤技术（Staerz和Bevan1986Proc.Natl.Acad.Sci.USA,83:1453,以及Staerz和Bevan1986Tmmunol·Today7:241。双特异性抗体也在美国专利第5,959,084号中描述。双特异性抗体的片段在美国专利第5，798,229号中描述。[0084]本发明公开的主题的方面涉及编码抗体、抗体片段或其衍生物的核酸分子。如本文可互换使用的，术语“核酸”、“寡核苷酸”和“多核苷酸”包括呈单链或双链体形式的多于一个核苷酸的RNA、DNA或RNADNA杂合序列。如本文使用的术语“核苷酸”作为形容词来描述包括呈单链或双链体形式的任何长度的RNA、DNA或RNADNA杂合序列的分子。术语“核苷酸”在本文中还用作名词以指单独核苷酸或核苷酸的变体，意指分子或较大核酸分子中的单独单元，包括嘌呤或嘧啶、核糖或脱氧核糖的糖部分和磷酸基团，或在寡核苷酸或多核苷酸内的核苷酸的情况下的磷酸二酯键。术语“核苷酸”在本文中还用于包括“修饰的核苷酸”，其包含以下修饰中的至少一个：（a替代性连接基团，（b嘌呤的类似形式，（c嘧啶的类似形式，或d类似的糖。类似的连接基团、嘌呤、嘧啶和糖的实例，参见例如PCT专利申请公布第TO9504064号。本发明公开主题的多核苷酸序列可以通过任何已知的方法，包括合成、重组、离体产生或其组合，以及利用本领域已知的任何纯化方法来制备。[0085]如本文使用的，“表达”指多核苷酸藉以从DNA模板被转录诸如被转录为mRNA或其他RNA转录物）的过程和或转录的mRNA藉以随后被翻译为肽、多肽、或蛋白的过程。如本文使用的，术语“多肽”或“蛋白”指包含一连串由肽键连接在一起的至少三个氨基酸的分子。术语“蛋白”和“多肽”可以互换使用。蛋白可以是重组的或天然来源的。[0086]本发明公开的编码抗体、抗体片段或其衍生物的核酸分子可以是例如，DNA、cDNA、RNA或合成产生的DNA或RNA或重组产生的嵌合核酸分子，所述重组产生的嵌合核酸分子包含单独的或组合的任何这些核酸分子。核酸分子也可以是对应于整个基因或其主要部分的基因组DNA或者其片段和衍生物。核苷酸序列可以对应于天然存在的核苷酸序列，或者可以包含单个或多于一个核苷酸取代、缺失或添加。在一些实施方案中，核酸分子为cDNA分子。[0087]本发明公开的主题还涉及包含本文描述的核酸分子的载体。所述载体可以是例如菌体、质粒、病毒或逆转录病毒载体。逆转录病毒载体可以是有复制能力的replicationcompetent或复制缺陷的。在后一种情况下，病毒繁殖通常将仅在补充宿主细胞中发生。[0088]本文描述的核酸分子可以被连接至包含用于在宿主细胞中繁殖的选择标志物的载体。通常，将质粒载体引入沉淀物诸如磷酸钙沉淀物或氯化铷沉淀物中，或具有带电脂质的复合物或碳基簇诸如富勒烯中。如果载体为病毒，则可以在应用于宿主细胞之前使用适当的包装细胞系在体外将其包装。[0089]在一些实施方案中，载体为表达载体，其中核酸分子被可操作地连接至允许在原核和或真核宿主细胞中转录和任选地表达的一个或更多个控制序列。所述核酸分子的表达包括核酸分子的转录，优选地被转录为可翻译的mRNA。确保在真核细胞，优选地哺乳动物细胞中表达的调节元件为本领域技术人员熟知的。所述调节元件通常包含确保转录起始的调节序列，并且任选地包含确保转录终止和转录物稳定化的多聚A信号。另外的调节元件可以包括转录以及翻译增强子。允许在原核宿主细胞中表达的可能的调节元件包括，例如，大肠杆菌B.coli中的lac、trp或tac启动子，并且用于允许在真核宿主细胞中表达的调节元件的实例为酵母中的AOXI或GALl启动子或者在哺乳动物或其他动物细胞中的CMV启动子、SV40启动子、RSV启动子Rous肉瘤病毒）、CMV增强子、SV40增强子或珠蛋白内含子。除了负责转录起始的元件以外，此类调节元件还可以包括转录终止信号，诸如在多核苷酸下游的SV40-多聚-A位点或tk-多聚-A位点。在该上下文中，合适的表达载体为本领域已知的，诸如Okayama-BergcDNA表达载体pcDVlPharmacia、pCDM8、pRcCMV、pcDNAl、pcDNA3In-vitrogene、pSP0RTIGIB⑶BRL。优选地，所述载体为表达载体和或基因转移或靶向载体。来源于病毒诸如逆转录病毒、牛痘病毒、腺相关病毒、疱疹病毒或牛乳头瘤病毒的表达载体可用于将本发明公开的主题的多核苷酸或载体递送至靶向的细胞群体。本领域技术人员熟知的方法可以用于构建重组病毒载体;参见，例如，在以下中描述的技术：Sambrook，MolecularCloningALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory2001,ThirdEditionN.Y.和Ausubel,CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenPublishingAssociatesandWileyInterscience，N.Y.1994。可选地，本发明公开的主题的核酸分子可以被重构为脂质体以用于递送至靶细胞。[0090]本发明公开的主题还涉及包含本发明公开的主题的载体的宿主细胞。所述宿主细胞可以是原核细胞或真核细胞。存在于宿主细胞中的本发明公开的主题的多核苷酸或载体可以被整合到宿主细胞的基因组中，或者其可以在染色体外维持。在这方面，还应当理解，本发明公开的主题的核酸分子可以用于“基因靶向”和或“基因置换”，用于经由同源重组恢复突变基因或产生突变基因；参见例如Mouellic，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,871990，4712-4716；Joyner,GeneTargeting,APracticalApproach,OxfordUniversityPress。[0091]宿主细胞可以是任何原核细胞或真核细胞，诸如细菌、昆虫、真菌、植物、动物、哺乳动物或优选地人类细胞。优选的真菌细胞为，例如酵母属Saccharomyces的那些，特别是酿酒酵母S.cerevisiae物种的那些。术语“原核的（prokaryotic”意指包括可以用用于表达本发明公开的主题的变体多肽的多核苷酸转化或转染的所有细菌。原核宿主细胞可以包括革兰氏阴性细菌以及革兰氏阳性细菌，诸如，例如，大肠杆菌，鼠伤寒沙门氏菌S·typhimurium、粘质沙雷氏菌（Serratiamarcescens和枯草芽抱杆菌（BaciIIussubtilis。编码本发明公开的主题的变体多肽的突变体形式的多核苷酸可以用于使用本领域普通技术人员通常已知的任何技术来转化或转染宿主细胞。用于制备融合的、被可操作地连接的基因并在细菌或动物细胞中表达它们的方法为本领域熟知的（Sambrook，MolecularCloningALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory2001，第三版）。其中描述的遗传构建体和方法可以用于在例如原核宿主细胞中表达本发明公开的主题的变体抗体、抗体片段或其衍生物。通常，包含促进插入的核酸分子的有效转录的启动子序列的表达载体与宿主细胞结合使用。表达载体通常包含复制起点、启动子和终止子，以及能够提供转化细胞的表型选择的特定基因。转化的原核宿主细胞可以根据本领域已知的技术在发酵罐中生长并培养以实现最佳的细胞生长。然后，本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物可以从生长培养基、细胞裂解物或细胞膜级分中分离。本发明公开的主题的微生物地或以其他方式表达的抗体、抗体片段或其衍生物的分离和纯化可以是通过任何常规方法，诸如，例如制备型层析分离和免疫分离，诸如包括使用单克隆或多克隆抗体的那止匕—、〇[0092]在一些实施方案中，宿主细胞为细菌、真菌、植物、两栖动物或动物细胞。动物细胞包括，但不限于，中国仓鼠卵巢CHO细胞、幼仓鼠肾（BHK细胞、猴肾细胞COS、3T3细胞、NSO细胞和许多其他细胞系。[0093]在一些实施方案中，宿主细胞为昆虫细胞。昆虫细胞包括，但不限于，SF9细胞系的细胞。在一些实施方案中，宿主细胞为人类细胞或人类细胞系。所述人类细胞包括，但不限于，人类胚胎肾细胞HEK293、293T、293freestyle。此外，所述人类细胞系包括，但不限于，HeLa细胞、人类肝细胞癌细胞例如，!fepG2、A549细胞。[0094]特别优先的细胞系通过确定哪些细胞系具有高表达水平（例如，表达KCNK9的细胞来选择。[0095]由不同细胞系或在转基因动物中表达的抗体将具有不同的糖基化状态是可能的。然而，由本文提供的核酸分子编码的所有抗体、或包含本文提供的氨基酸序列的所有抗体均为本发明公开的主题的一部分，而与抗体的糖基化状态无关。[0096]本发明公开的主题还提供了转基因非人类动物，所述转基因非人类动物包含可以用于产生本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物的本发明公开主题的一个或更多个核酸分子。抗体可以在山羊、牛cows、马、猪、大鼠、小鼠、兔、仓鼠或其他哺乳动物的组织或体液诸如乳、血液或尿液中产生和回收。参见，例如，美国专利第5,827,690号、第5，756,687号、第5,750，172号和第5,741，957号。如以上描述，包含人类免疫球蛋白基因座的非人类转基因动物可以通过用KCNK9或其部分例如，MlPl结构域免疫接种来产生。[0097]本发明公开的主题的方面涉及一种用于制备抗体、抗体片段或其衍生物的方法，所述方法包括在允许合成所述抗体、抗体片段或其衍生物的条件下培养本发明公开的主题的宿主细胞，以及从所述培养物中回收所述抗体、抗体片段或其衍生物。[0098]转化的宿主细胞可以根据本领域已知的技术在发酵罐中生长并培养以实现最佳的细胞生长。在表达后，本发明公开的主题的完整抗体、其二聚体、单独轻链和重链或其他免疫球蛋白形式可以根据本领域的标准程序纯化，所述本领域的标准程序包括，硫酸铵沉淀、亲和柱、柱层析、凝胶电泳等；参见，Scopes，“ProteinPurification”，Springer-Verlag，N.Y.1982。然后，本发明公开的主题的抗体或其相应的免疫球蛋白链可以从生长培养基、细胞裂解物或细胞膜级分中分离。本发明公开的主题的例如微生物表达的抗体或免疫球蛋白链的分离和纯化可以是通过任何常规方法，诸如，例如制备型层析分离和免疫分离，诸如包括使用针对例如本发明公开的主题的抗体的恒定区的单克隆或多克隆抗体的那些。[0099]对本领域的技术人员将明显的是，本发明公开的主题的抗体可以与其他部分缀合，用于例如药物靶向和成像应用。在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物与至少一种剂缀合。在一些实施方案中，至少一种剂选自由以下组成的组:治疗剂和标记剂。此类缀合可以在将抗体或抗原表达于附着位点之后以化学方式进行，或者缀合产物可以在DNA水平上被工程化到本发明公开的主题的抗体或抗原中。然后将DNA在合适的宿主系统中表达，并且如果需要，收集表达的蛋白并进行复性。[0100]在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物与效应物缀合，所述效应物诸如加利车霉素（calicheamicin、奥瑞他汀EAuristatinE或单甲基奥瑞他汀EmonomethylauristatinEMMAE、放射性同位素或毒性化学治疗剂诸如格尔德霉素geldanamycin和美登素maytansine。在一些实施方案中，抗体缀合物可用于革巴向表达KCNK9的细胞，例如，癌细胞，以用于消除。此外，本发明公开的主题的抗体抗体片段与放射性同位素的连接，例如，为肿瘤治疗提供了优势。与化学疗法和其他常规形式的癌症治疗不同，放射免疫疗法或放射性同位素-抗体组合物combination的施用直接革El向癌细胞，对周围正常健康组织的损伤最小。预期用于在本发明公开的主题中使用的放射性同位素包括例如3H、14C、15N、35S、9°Y、99Tc、mIn、125I、131I。[0101]本发明公开的主题的方面涉及将本文描述的抗体、抗体片段或其衍生物与用于治疗癌症的至少一种剂缀合。在一些实施方案中，至少一种剂为抗赘生物剂。在一些实施方案中，当与至少一种剂有毒的化学治疗药物缀合时，本发明公开的主题的抗体可以用于治疗癌症，所述至少一种剂有毒的化学治疗药物:诸如格尔德霉素Mandler等，J.Natl.CancerInst.,9219,1549-512000和美登素，例如，美登醇maytansinoid药物，DMlLiu等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:8618-86231996奥瑞他汀EDoronina等，Nat·Biotechnol·21:778-7842003，和单甲基奥瑞他汀EFrancisco等，Blood2003;DOI10.1182blood-2003-01-0039。在一些实施方案中，抗体、抗体片段或其衍生物与至少一种剂经由接头缀合。在一些实施方案中，接头选自由以下组成的组:可裂解接头和不可裂解接头。在酸性或还原条件下或暴露于特定蛋白酶后释放药物的不同接头用于该技术。在一些实施方案中，可裂解接头为肽接头。在一些实施方案中，肽接头包括缬氨酸-瓜氨酸肽接头。在一些实施方案中，不可裂解接头为硫醚接头。本发明公开的主题的抗体可以如本领域描述被缀合。[0102]在一些方面，本发明公开的主题提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物、核酸分子、载体、宿主细胞，或通过本发明公开的主题的方法获得的抗体、抗体片段或其衍生物。[0103]如本文采用的术语“组合物composition”包含本发明的至少一种化合物。优选地，此类组合物为药物组合物或诊断组合物。[0104]组合物可以呈固体、液体或气体形式，并且可以呈一种或更多种粉末、一种或更多种片剂、一种或更多种溶液或一种或更多种气雾剂的形式，以及其他。所述组合物可以包含本发明公开的主题的至少两种、优选地三种、更优选地四种、最优选地五种化合物或编码所述化合物的核酸分子。所述组合物还可以包含通过本发明公开的主题的方法获得的优化的抗体、抗体片段或其衍生物。[0105]在一些实施方案中，药物组合物任选地包含药学上可接受的载体和或稀释剂。本文公开的药物组合物可以用于治疗与过度KCNK9表达水平和或活性相关的紊乱（例如，KCNK9表达或过表达的疾病例如，表达KCNK9的癌症）。[0106]本发明公开的主题发明提供了药物组合物，所述药物组合物包含待用于治疗与KCNK9表达或过表达相关的疾病紊乱的本发明公开的主题的化合物。[0107]合适的药物载体、赋形剂和或稀释剂的实例为本领域熟知的，并且包括磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液，诸如油水乳液、多种类型的湿润剂、无菌溶液等。包含此类载体的组合物可以通过熟知的常规方法进行配制。这些药物组合物可以以合适的剂量施用至受试者。合适的组合物的施用可以通过不同的方式来实现，例如，通过静脉内、腹膜内、皮下、肌内、局部、皮内、鼻内或支气管内施用。本发明公开的主题的组合物也可以被直接施用至靶位点，例如，通过向外部或内部靶位点（如脑的基因枪递送。给药方案将由主治医师和临床因素确定。如医学领域熟知的，用于任何一名患者的剂量取决于许多因素，包括患者的体型、体表面积、年龄、待施用的具体化合物、性别、施用的时间和途径、一般健康状况及同时施用的其他药物。蛋白性proteinaceous药物活性物质可以以每剂量Iyg和100mgkg体重之间的量存在;然而，特别是考虑到以上提及的因素，设想低于或高于该示例性范围的剂量。如果方案为连续输注，它也应该在Ipg至IOOmg千克体重分钟的范围内。[0108]进展可以通过定期评价来监测。本发明公开的主题的组合物可以局部或全身施用。[0109]用于肠胃外施用的制剂包括无菌水性或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的实例为丙二醇、聚乙二醇、植物油诸如橄榄油和可注射有机酯诸如油酸乙酯。水性载体包括水、醇水性溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。肠胃外媒介物包括氯化钠溶液、林格氏右旋糖Ringer’sdextrose、右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液（lactatedRinger’s或不挥发性的油。静脉内媒介物包括流体和营养物补充剂、电解质补充剂诸如基于林格氏右旋糖的那些等。还可以存在防腐剂和其他添加剂，诸如，例如，抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。此外，根据药物组合物的预期用途，本发明公开的主题的药物组合物可以包含另外的剂。特别优选的是，药物组合物包含另外的剂，如，例如，另外的抗赘生物剂、小分子抑制剂、抗肿瘤剂或化学治疗剂。[0110]本发明公开的主题的方面还涉及包含抗体、抗体片段或其衍生物与至少一种抗赘生物剂组合的药物组合物。所述组合有效例如抑制异常细胞生长。许多抗赘生物剂为本领域已知的。在一个实施方案中，抗赘生物剂选自以下的组:治疗性蛋白，包括，但不限于，抗体或免疫调节蛋白。在另一个实施方案中，抗赘生物剂选自由以下组成的小分子抑制剂或化学治疗剂的组:有丝分裂抑制剂、激酶抑制剂、烷化剂、抗代谢物、嵌入抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶、拓扑异构酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、抗存活剂、生物响应调节剂、抗激素，例如，抗雄激素和抗血管生成剂。[0111]本发明公开的主题的方面还涉及包含抗体、抗体片段或其衍生物与至少一种放射治疗剂组合的药物组合物。[0112]本发明公开的主题的方面还涉及包含抗体、抗体片段或其衍生物与至少一种免疫治疗剂组合的药物组合物。[0113]本发明公开的主题的方面还涉及包含抗体、抗体片段或其衍生物与至少一种光增敏剂photosensitizingagent组合的药物组合物。[0114]在一些实施方案中，当组合施用时，两种或更多种剂可以具有协同作用。如本文使用的，术语“协同作用（synergy”、“协同的（synergistic”、“协同地（synergisticalIy”及其派生词derivation，诸如以“协同作用”或“协同组合”的方式或呈“协同组合物”的方式指这样的情形，即剂和至少一种另外的治疗剂的组合的生物学活性大于当单独施用时各剂的生物学活性的总和的情形。[0115]协同作用可以用“协同作用指数（SI”表示，其通常可以通过F.C.Kull等AppliedMicrobiology9,5381961描述的方法，由通过以下确定的比值来确定：[0116]QaQA+QbQB=协同作用指数（SI[0117]其中：[0118]Qa为单独起作用的组分A的浓度，其产生关于组分A的终点；[0119]Qa为混合物中的组分A的浓度，其产生终点；[0120]Qb为单独起作用的组分B的浓度，其产生关于组分B的终点；以及[0121]Qb为混合物中的组分B的浓度，其产生终点。[0122]通常，当QaQA和QbQB的总和大于1时，指示拮抗作用。当总和等于1时，指示累加作用additivity。当总和小于1时，表示协同作用。SI越低，该特定混合物显示的协同作用就越大。因此，“协同组合”具有比基于当单独使用时观察到的单独的组分的活性可预期的活性更高的活性。此外，组分的“协同有效量”指与在例如组合物中存在的另一种治疗剂引起协同作用所需的组分的量。[0123]在一些实施方案中，本发明公开的主题的药物组合物也可以用于兽医目的。[0124]在一些方面，本发明公开的主题涉及本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物、核酸分子、载体、宿主细胞，或通过本发明公开的主题的方法获得的抗体、抗体片段或其衍生物用于制备用于预防或治疗与过度和或异常KCNK9表达和或活性相关的紊乱的药物组合物的用途。[0125]在一些方面，本发明公开的主题提供了一种诊断组合物，所述诊断组合物包含本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物、本发明公开的主题的核酸分子、载体、宿主细胞，或通过本发明公开的主题的方法获得的抗体、抗体片段或其衍生物以及任选地药学上可接受的载体。[0126]本发明公开的主题的诊断组合物可用于检测不同细胞、组织或样品中哺乳动物KCNK9钾通道的不期望的表达或过表达，包括使样品与本发明公开的主题的抗体接触，并检测样品中KCNK9的存在。因此，本发明公开的主题的诊断组合物可以用于评价KCNK9相关疾病的发作或疾病状态。如本文使用的，“KCNK9相关疾病”指与KCNK9的异常表达水平和或活性直接或间接相关的任何疾病、状况或紊乱。此外，恶性细胞，诸如表达KCNK9的癌细胞，可以用本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物进行靶向。已经结合本发明公开的主题的抗体的细胞因此可以被免疫系统功能诸如补体系统或细胞介导的细胞毒性攻击，因此降低癌细胞数目或消除癌细胞。这些考虑同样适用于转移肿瘤和复发肿瘤的诊断。[0127]在本发明公开的主题的另一个方面，本文描述的抗体、抗体片段或其衍生物与标记剂或标记基团缀合。此类抗体适用于诊断应用。如本文使用的，术语“标记基团”指可检测标志物，例如，放射性标记的氨基酸或可以被标记的抗生物素蛋白检测的生物素部分。用于标记多肽和糖蛋白（诸如抗体的多种方法为本领域已知的，并且可以用于进行本发明公开的主题。合适的标记基团的实例包括，但不限于以下：放射性同位素或放射性核素（例如，3H、14C、15N、35S、9〇Y、99Tc、lllIn、125l、13ll、焚光基团（例如，FITC、罗丹明、镧系兀素焚光体phosphor、酶促基团（例如，辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酶）、化学发光基团、生物素基团或由第二报告物识别的预定多肽表位例如，亮氨酸拉链对序列、第二抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签）。[0128]在某些方面，可以期望的是，标记基团通过多种长度的间隔区臂附接以降低潜在的空间位阻。[0129]在一些方面，本发明公开的主题提供了一种评价表达KCNK9的细胞的存在的方法，所述方法包括使疑似在其表面上表达KCNK9的细胞或组织与本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物或者与本发明公开的主题的药物组合物接触。[0130]在某些方面，本发明公开的主题提供了一种抑制KCNK9活性的方法，所述方法包括使在其表面上表达KCNK9的细胞或组织与本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物或者与本发明公开的主题的药物组合物接触。[0131]在其他方面，本发明公开的主题提供了一种抑制表达KCNK9的癌细胞的生长或存活的方法，所述方法包括使在其表面上表达KCNK9的癌细胞与本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物或者与本发明公开的主题的药物组合物接触。[0132]在一些实施方案中，接触在体外在细胞或组织中进行。在一些实施方案中，细胞或组织包括人类细胞或组织。在一些实施方案中，接触在受试者体内进行。[0133]术语“受试者”和“患者”在本文中被可互换地使用。通过本发明公开的方法在其很多实施方案中治疗的受试者合意地为人类受试者，然而应当理解的是，本文描述的方法关于所有脊椎动物物种是有效的，所有脊椎动物物种意图被包括在术语“受试者”中。因此，“受试者”可以包括用于医学目的，诸如用于现存状况或疾病的治疗或用于预防状况或疾病的发作的预防性治疗的人类受试者，或用于医学目的、兽医目的或发育目的的动物受试者。合适的动物受试者包括哺乳动物，哺乳动物包括但不限于，灵长类动物，例如人类、猴、猿等;牛科动物bovine，例如，家牛、公牛等;绵羊类ovine，例如，绵羊sheep等;羊亚科动物caprine，例如，山羊goat等;猪类porcine，例如，猪、畜牧猪hog等；马科动物equine，例如，马、驴、斑马等；猫科动物（feIine，包括野生猫和家养猫；犬科动物canine，包括犬dog;兔类动物，包括兔rabbit、野兔等;和嗤齿类动物，包括小鼠、大鼠等。动物可以是转基因动物。在一些实施方案中，受试者为人类，其包括，但不限于，胎儿、新生儿、婴儿、少年和成年的受试者。此外，“受试者”可以包括罹患或疑似罹患状况或疾病的患者。[0134]在一些方面，本发明公开的主题提供了一种抑制受试者中的肿瘤的生长和或转移的方法，所述方法包括将本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物或者本发明公开的主题的药物组合物以有效抑制受试者中的肿瘤的生长和或转移的量施用至受试者。在一些实施方案中，本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物抑制受试者中乳腺肿瘤的生长和或转移。在一些实施方案中，本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物抑制受试者中乳腺肿瘤的转移。在一些实施方案中，本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物抑制受试者中肺肿瘤的生长和或转移。在一些实施方案中，本发明公开的抗体、抗体片段或其衍生物抑制受试者中肺肿瘤的转移。[0135]在一些方面，本发明公开的主题提供了一种刺激受试者中的补体依赖性癌细胞的细胞毒性的方法，所述方法包括将本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物或者本发明公开的主题的药物组合物以有效刺激受试者中的补体依赖性癌细胞的细胞毒性的量施用至受试者。[0136]在一些实施方案中，本发明公开的主题提供了一种用于治疗有相应需要的受试者中表达KCNK9的癌症的方法，所述方法包括将本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物或者本发明公开的主题的药物组合物以有效治疗受试者中表达KCNK9的癌症的量施用至受试者。[0137]在一些方面，本发明公开的主题提供了一种治疗与哺乳动物中KCNK9的异常水平表达和或活性直接或间接相关的疾病的方法，所述方法包括将抗体、抗体片段或其衍生物以有效治疗该疾病的量施用至哺乳动物。[0138]在一些实施方案中，本发明公开的主题提供了一种用于治疗与过度KCNK9表达和或活性相关的紊乱的方法，所述方法包括将本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物或者本发明公开的主题的药物组合物以有效治疗与过度KCNK9表达相关的紊乱的量施用至受试者。[0139]本发明公开的主题预期了治疗过度KCNK9表达和或活性牵涉的任何疾病、状况或紊乱，即与KCNK9的异常表达水平和或活性直接或间接相关的疾病。通常，与过度KCNK9表达和或活性相关的疾病包括，但不限于，心血管疾病、内分泌系统疾病、胃肠道疾病、癌症、炎症、血液疾病、神经系统疾病、泌尿系统疾病和呼吸系统疾病。在一些实施方案中，癌症为乳腺癌。在一些实施方案中，癌症为小细胞肺癌。在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌。[0140]KCNK9在多种人类组织中表达参见，例如，W02005075510，本文通过引用以其整体并入）。[0141]神经系统紊乱[0142]神经系统紊乱包括中枢神经系统紊乱（CNS紊乱）以及外周神经系统紊乱（PNS紊乱。[0143]CNS紊乱包括，但不限于，脑损伤、脑血管疾病及其结果、帕金森病、皮质基底节变性、运动神经元疾病、痴呆，包括ALS、多发性硬化、创伤性脑损伤、中风、卒中后（poststroke、创伤后脑损伤和小血管性脑血管疾病。在定义的含义范围内，痴呆，诸如阿尔茨海默病、血管性痴呆、路易体痴呆、连锁于17号染色体伴帕金森病的额颞叶痴呆frontotemporaldementiaandParkinsonismlinkedtochromosome17、客页颞叶痴呆，包括皮克氏病Pick’sdisease、进行性核性麻痹、皮质基底节变性、亨廷顿氏舞蹈病Huntington’sdisease、丘脑变性、克雅氏病痴呆（Creutzfeld-Jakobdementia、HTV痴呆症、伴有痴呆的精神分裂症和多发性神经炎性精神病Oiorsakoffspsychosis，也被认为是CNS素乱。[0144]类似地，认知相关紊乱，诸如轻度认知损伤、年龄相关记忆损伤、年龄相关认知衰退、血管认知损伤、注意缺陷紊乱、注意缺陷多动紊乱和儿童学习障碍的记忆干扰memorydisturbancesinchildrenwithlearningdisabilities也被认为是CNS紊乱。[0145]在该定义的意义之内，疼痛也被认为是CNS紊乱。疼痛可以与CNS紊乱相关，诸如多发性硬化、脊髓损伤、坐骨神经痛、腰椎术后综合症failedbacksurgerysyndrome、创伤性脑损伤、癫痫、帕金森病、卒中后、和脑和脊髓中的血管病变例如，梗死、出血、血管畸形）。非中枢性神经性疼痛包括与乳房切除术后疼痛综合征postmastectomypain、幻影感觉、反射性交感神经营养不良（RSD、三叉神经性神经病变（trigeminalneuralgiaradioculopathy相关的疼痛，术后疼痛，HIVAIDS相关的疼痛，癌症疼痛，代谢性神经病变metabolicneuropathies例如，糖尿病神经病、继发于结缔组织疾病的血管炎性神经病变），例如，与肺癌或白血病或淋巴瘤或前列腺癌、结肠癌或胃癌相关的副肿瘤性多发性神经病，三叉神经痛，颅神经痛和疱疹后神经痛。与外周神经损害相关的疼痛，中枢性疼痛（即由于脑缺血和多种慢性疼痛，即，腰痛、背痛（下背痛）、炎性和或风湿性疼痛、头痛例如，先兆偏头痛migrainewithaura、无先兆偏头痛及其他偏头痛紊乱）、情景性和慢性紧张型头痛（episodicandchronictension-typeheadache、紧张型样头痛、丛集性头痛、和慢性阵发性偏头痛chronicparoxysmalhemicrania也是CNS紊乱。[0146]内脏疼痛诸如胰腺炎、肠腺性膀胱炎（intestinalcystitis、痛经、肠易激综合征、克罗恩病、胆绞痛、输尿管绞痛、心肌梗死和盆腔疼痛综合征，例如，外阴痛、睾丸痛orchialgia、尿道综合征和前列腺痛也是CNS紊乱。[0147]也被认为是神经系统紊乱的是急性疼痛，例如，术后疼痛和创伤之后的疼痛。[0148]人类KCNK9在以下脑组织中高度表达:胎脑、脑、阿尔茨海默病脑、小脑、小脑右）、小脑（左）、大脑皮层、阿尔茨海默病大脑皮层、额叶、阿尔茨海默病脑额叶、枕叶、顶叶、颞叶、中央前回、中央后回、小脑扁桃体、小脑蝴部（vermiscerebeIli、脑桥、大脑脑脊膜cerebralmeninges、大脑脚cerebralpeduncles、海马体、丘脑、背根神经节、脊髓、视网膜。脑组织中的表达，并且特别是病变组织阿尔茨海默病脑组织和健康组织脑之间、病变组织阿尔茨海默病大脑皮层和健康组织大脑皮层之间、病变组织阿尔茨海默病脑额叶和健康组织额叶之间的差异表达表明，人类KCNK9或mRNA可以用于诊断神经系统疾病。另外，可以调节人类KCNK9的活性以治疗神经系统疾病。[0149]心血管紊乱[0150]心力衰竭被定义为一种其中心脏功能的异常导致心脏衰竭而不能以与代谢组织的需要相称的速率栗血的病理生理状态。心力衰竭包括所有形式的栗送衰竭，诸如独立于潜在原因的高输出和低输出，急性和慢性、右侧或左侧、收缩性或舒张性。[0151]心肌梗死MI通常是由先前因动脉硬化而变窄的冠状动脉的血栓形成性闭塞后冠状动脉的血液流动急剧减少引起的。包括MI预防一级和二级预防）以及MI的急性治疗和并发症的预防。[0152]缺血性疾病为冠状动脉流动受限的状况，导致灌注不足以满足心肌对氧的需要。这组疾病包括稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛和无症状缺血。[0153]心律失常包括所有形式的心房性和心室性快速型心律失常、房性心动过速，心房扑动，心房颤动，房室折返性心动过速，预激综合征，室性心动过速，心室扑动、心室颤动、以及心动过缓形式的心律失常。[0154]高血压性血管疾病包括原发性以及各种继发性动脉高血压、肾性、内分泌性、神经源性等。基因可以用作用于治疗高血压以及用于预防起因于心血管疾病的所有并发症的药物靶。[0155]外周血管疾病被定义为其中动脉和或静脉流量减少、导致血液供应和组织氧需求之间的不平衡的血管疾病。外周血管疾病包括慢性外周动脉闭塞性疾病PAOD、急性动脉血栓形成和栓塞、炎性血管紊乱、雷诺现象和静脉紊乱。[0156]动脉粥样硬化为一种其中血管壁被重塑、损害血管腔的心血管疾病。动脉粥样硬化重塑过程涉及在血管壁内膜中细胞，平滑肌细胞和单核细胞巨噬细胞炎性细胞两者的积累。这些细胞摄取可能来自循环的脂质，形成成熟的动脉粥样硬化病变。[0157]尽管这些病变的形成为慢性过程，发生在几十年的成年人类生活中，大多数与动脉粥样硬化相关的发病发生在病变破裂时，释放迅速堵塞动脉的血栓形成碎片。当此类急性事件发生于冠状动脉中时，心肌梗塞可能接着发生，且最坏的情况可能导致死亡。[0158]动脉粥样硬化病变的形成可以被认为发生在五个重叠阶段，诸如迀移、脂质积累、炎性细胞的募集、血管平滑肌细胞增殖和细胞外基质沉积。这些过程的每一个均可以显示发生于动脉粥样硬化的人类模型和动物模型中，但每一个对病理学的相对贡献和病变的临床意义尚不清楚。[0159]因此，对用于治疗心血管疾病诸如动脉粥样硬化和与冠状动脉疾病相关的其他状况的治疗方法和剂存在需求。[0160]心血管疾病包括但不限于心脏和血管系统的紊乱，如充血性心力衰竭、心肌梗死、心脏缺血性疾病、各种心房性和心室性心律失常、高血压血管疾病、外周血管疾病和动脉粥样硬化。[0161]血流中过高或过低水平的脂肪，特别是胆固醇，可以引起长期的问题。发展动脉粥样硬化和冠状动脉或颈动脉疾病的风险并且因此具有心脏病发作或中风的风险）随着总胆固醇水平的增加而增加。然而，极低胆固醇水平可能不健康。脂质代谢紊乱的实例为高脂血症血液中异常高水平的脂肪胆固醇、甘油三酯或两者），可能是由高脂血症家族史引起的）、肥胖、高脂肪饮食、缺乏运动、中度至高度酒精摄入、吸烟、控制不良的糖尿病和甲状腺功能不全underactivethyroidgland、遗传性高脂血症（I型高脂蛋白血症家族性高乳糜微粒血症）、II型尚脂蛋白血症家族性尚胆固醇血症）、III型尚脂蛋白血症、IV型尚脂蛋白血症或V型高脂蛋白血症）、低脂蛋白血症、脂质沉积（由代谢脂肪的酶的异常引起）、戈谢氏病（Gaucher’sdisease、尼曼-皮克病（Niemann-Pickdisease、法布里病（Fabry’sdisease、沃尔曼氏病（Wolman’sdisease、脑腫黄瘤病（cerebrotendinousxanthomatosis、谷固醇血症、雷夫苏姆病Refsum’sdisease或泰-萨克斯病Tay-Sachsdisease〇[0162]肾紊乱可以导致高血压或低血压。可能导致高血压的肾问题的实例为肾动脉狭窄、肾盂肾炎、肾小球性肾炎、肾肿瘤、多囊肾疾病、肾损伤或影响肾的放射疗法。[0163]过度排尿可以导致低血压。[0164]人类KCNK9在以下心血管相关组织中高度表达：心包、心房（左）、心室（左）、主动脉、动脉、静脉、肾上腺、血小板、肾、肾肿瘤。在以上提及的组织中的表达表明，人类KCNK9或mRNA可以用于诊断心血管疾病。另外，可以调节人类KCNK9的活性以治疗心血管疾病。[0165]人类KCNK9在以下的肾组织中高度表达:肾、肾肿瘤中。在肾组织中的表达表明，人类KCNK9或mRNA可以用于诊断血压紊乱如心血管紊乱。另外，可以调节人类KCNK9的活性以治疗但不限于血压紊乱，如高血压或低血压。[0166]人类KCNK9在肾上腺中高度表达。在肾上腺组织中的表达表明，人类KCNK9或mRNA可以用于诊断作为心血管紊乱的血压紊乱。另外，可以调节人类KCNK9的活性以治疗血压紊乱，如高血压或低血压。[0167]血液紊乱[0168]血液紊乱包括血液及其所有成分的疾病以及涉及血液所有成分的产生或降解的器官和组织的疾病。[0169]血液紊乱包括但不限于1贫血、2骨髓增生性紊乱、3出血性紊乱、4白细胞减少症、5嗜酸粒细胞性紊乱、6白血病、7淋巴瘤、8血浆细胞恶液质（PlasmaCellDyscrasias、9在血液紊乱的过程中的脾紊乱。根据1的紊乱包括，但不限于，由于有缺陷的或不足的hem合成、不足的红细胞生成的贫血。根据2的紊乱包括，但不限于，真性红细胞增多症、肿瘤相关红细胞增多症、骨髓纤维化、血小板增多症。根据3的紊乱包括，但不限于，血管炎、血小板减少、肝素诱导的血小板减少、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒症综合征、遗传性和获得性血小板功能紊乱、遗传性凝血紊乱。根据4的紊乱包括，但不限于，中性粒细胞减少症、淋巴细胞减少症。根据5的紊乱包括，但不限于，嗜酸性粒细胞增多症、特发性嗜酸性粒细胞增多综合征。根据6的紊乱包括，但不限于，急性髓性白血病、急性成淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、骨髓增生异常综合征。根据7的紊乱包括，但不限于，霍奇金病Hodgkin’sdisease、非霍奇金淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤Burkitt’slymphoma、蕈样肉芽肿病、皮肤T细胞淋巴瘤。根据8的紊乱包括，但不限于，多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链疾病。在前述特发性血小板减少性紫癜的延伸中，缺铁性贫血、巨幼细胞贫血维生素B12缺乏）、再生障碍性贫血、地中海贫血、恶性淋巴瘤骨髓侵袭、恶性淋巴瘤皮肤侵袭、溶血性尿毒症综合征、巨型血小板疾病也被认为是血液疾病。[0170]人类KCNK9在以下血液系统组织中高度表达:红细胞、淋巴结、血小板、骨髓⑶71+细胞。在以上提及的组织中的表达表明，人类KCNK9或mRNA可以用于诊断血液疾病。另外，可以调节人类KCNK9的活性以治疗血液紊乱。[0171]胃肠和肝疾病[0172]胃肠疾病包括可以是获得或遗传的良性或恶性或化生的并且可以影响胃肠道器官或整个身体的胃肠道器官的原发性或继发性的急性或慢性疾病。胃肠疾病包括但不限于1食管紊乱如失弛缓症、贲门失弛缓症（vigoruosachalasia、吞咽困难、环咽肌不协调cricopharyngealincoordination、食管前性吞咽困难（pre-esophagealdysphagia、弥漫性食管痉挛、癔球症globussensation、巴雷特氏化生Barrett’smetaplasia、胃食管反流，2胃和十二指肠紊乱如功能性消化不良、胃粘膜炎症、胃炎、应激性胃炎、慢性糜烂性胃炎、胃腺萎缩、胃组织化生、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃赘生物，3胰腺紊乱如急性或慢性胰腺炎、胰腺外分泌或内分泌组织功能不全如脂肪泻、糖尿病、外分泌或内分泌胰腺赘生物，如3.1多发性内分泌腺瘤综合征、导管腺癌、囊腺癌、胰岛细胞肿瘤、胰岛素瘤、胃泌素瘤、类癌肿瘤、胰高血糖素瘤、佐林格-埃利森综合征Zollinger-Ellisonsyndrome、血管活性肠肽瘤综合征Vipomasyndrome、吸收不良综合征，4肠紊乱如肠道慢性炎性疾病、克罗恩病、肠梗阻，腹泻与便秘、结肠无力（colonicinertia、巨结肠、吸收不良综合征、溃疡性结肠炎，4.1功能性肠紊乱如肠易激综合征，4.2肠赘生物如家族性息肉病、腺癌、原发性恶性淋巴瘤、类癌瘤、卡波西肉瘤、息肉、结肠和直肠癌。[0173]肝疾病包括可以是获得或遗传的良性或恶性的并且可以影响肝或整个身体的肝的原发性或继发性的急性或慢性疾病或者损伤。肝疾病包括但不限于胆红素代谢紊乱、黄疸、吉尔伯特综合征（syndromsofGilbert’s、Crigler-Najjar综合征、杜宾一约翰森Dubin-Johnson综合征和Rotor综合征;肝内胆汁齡积、肝肿大、门静脉高压、腹水、Budd-Chiari综合征、门脉体循环性脑病（portal-systemicencephalopathy、脂肪肝、脂肪变性、Reye综合征、由于酒精引起的肝疾病、酒精性肝炎或肝硬化、肝纤维化和肝硬化、由于新陈代谢先天错误的或外源物质的肝纤维化和肝硬化、贮积病、戈谢氏综合征、Zellweger氏综合征、威尔逊氏病、急性或慢性肝炎、病毒性肝炎及其变化形式，由于病毒、细菌、真菌、原生动物、蠕虫引起的肝炎性状况;药物诱导的肝紊乱、慢性肝疾病如原发性硬化性胆管炎、α1-抗胰蛋白酶缺乏症、原发性胆汁性肝硬化、术后肝紊乱如术后肝内胆汁郁积、肝肉芽肿、与全身性疾病相关的血管性肝紊乱、良性或恶性肝赘生物、新生儿或早产儿的肝代谢紊乱。[0174]人类KCNK9在以下胃肠系统的组织中高度表达:食管、食管肿瘤、结肠、结肠肿瘤、回肠、回肠肿瘤、回肠慢性炎症、直肠。在以上提及的组织中的表达，并且特别是病变组织回肠慢性炎症和健康组织回肠之间的差异表达表明，人类KCNK9或mRNA可以用于诊断胃肠紊乱。[0175]另外，可以调节人类KCNK9的活性以治疗胃肠紊乱。[0176]内分泌系统和激素[0177]内分泌系统由一组器官组成，其主要功能为产生激素并将激素直接分泌到血流中。内分泌系统的主要器官为下丘脑、脑垂体、甲状腺、甲状旁腺、胰腺胰岛、肾上腺、睾丸和卵巢。[0178]下丘脑分泌刺激垂体的几种激素:一些触发垂体激素的释放;其他抑制垂体激素的释放。[0179]脑垂体协调其他内分泌腺的许多功能，但一些垂体激素具有直接作用。[0180]胰腺的分泌胰岛素的细胞对葡萄糖和脂肪酸作出响应。甲状旁腺细胞对钙和磷酸盐作出响应。肾上腺髓质（肾上腺的一部分对由副交感神经系统的直接刺激作出响应。[0181]当内分泌腺发生障碍malfunction时，血液中的激素水平可变得异常高或低，破坏身体功能。许多紊乱由内分泌系统或激素发生障碍引起。此类紊乱的实例呈现于以下中。[0182]糖尿病为一种其中由于身体不能适当释放或使用胰岛素而使葡萄糖的血液水平异常尚的素乱。[0183]患有I型糖尿病胰岛素依赖性糖尿病）的人员产生很少的胰岛素或根本不产生胰岛素。[0184]在I型糖尿病中，胰腺的多于90%的胰岛素产生细胞细胞被永久地破坏。所导致的胰岛素缺乏为严重的，并且为了存活，患有I型糖尿病的人必须定期注射胰岛素。[0185]在II型糖尿病非胰岛素依赖性糖尿病）中，身体发展对胰岛素作用的耐受性，导致相对胰岛素缺乏。[0186]胰腺具有两个主要功能:将包含消化酶的流体分泌到十二指肠中并分泌激素胰岛素和胰高血糖素。慢性胰腺炎为一种胰腺的长期炎症。最终，胰腺的分泌胰岛素的细胞可以被破坏，逐渐导致糖尿病。胰岛素瘤为分泌胰岛素的罕见类型的胰腺肿瘤。胰岛素瘤的症状起因于低血液葡萄糖水平。胃泌素瘤为一种产生过度水平的激素胃泌素的胰腺肿瘤，所述过度水平的激素胃泌素刺激胃分泌酸和酶，引起消化性溃疡。由胃泌素瘤分泌的过度胃泌素引起症状，称为卓-艾综合征Zollinger-Ellisonsyndrome。胰高血糖素瘤为一种产生激素胰高血糖素的肿瘤，其升高血液中的葡萄糖水平并产生独特的皮疹。[0187]尿崩症为一种不足水平的抗利尿激素引起过度口渴（烦渴和过度产生非常稀尿液多尿的紊乱。尿崩症来源于减少的抗利尿激素血管升压素的产生。[0188]身体具有两个肾上腺。肾上腺髓质分泌激素，诸如肾上腺素adrenaline肾上腺素epinephrine，其影响血压、心率、出汗以及由交感神经系统调节的其他活动。皮层分泌许多不同的激素，包括皮质类固醇可的松样激素）、雄激素类雄激素和矿物质皮质激素，其控制血压和体内盐和钾的水平。[0189]特征在于肾上腺功能不全的疾病为艾迪生氏病Addison’sdisease肾上腺皮质功能不全）。[0190]几种紊乱的特征在于过度活跃的肾上腺。原因可以是肾上腺本身的变化或由脑垂体的过度刺激。这些疾病的实例列于以下中。[0191]雄激素类固醇（睾酮和类似的激素，导致男性化）的过度产生、皮质类固醇的过度产生（原因可能是垂体或肾上腺的肿瘤，导致库兴氏综合征Cushing’ssyndrome、纳尔逊综合征Nelson’ssyndrome由双侧肾上腺去除的人发展的并且其特征在于脑垂体肿大）、醛固酮的过度产生醛固酮增多症）、康氏综合征Conn’ssyndrome由肿瘤引起的醛固酮增多症）、嗜铬细胞瘤起源于肾上腺的嗜铬细胞的肿瘤，引起儿茶酚胺的过度产生）。甲状腺为位于喉结Adam’sapple下的小腺体。甲状腺分泌甲状腺激素，甲状腺激素控制代谢率。甲状腺捕获碘并将其加工为甲状腺激素。[0192]正常甲状腺病态综合征的特征在于T4型甲状腺激素至T3型甲状腺激素转化的缺失。甲状腺功能亢进过度活跃的甲状腺，产生过多激素可能具有几个原因。甲状腺炎（甲状腺的炎症通常导致甲状腺功能亢进期。该炎症可能会损害甲状腺，因此在晚期阶段，该疾病的特征在于短暂或永久性缺乏活动（甲状腺功能减退）。[0193]毒性甲状腺结节（腺瘤）通常大量地产生甲状腺激素。毒性多结节性甲状腺肿Plummer氏病为一种其中存在许多结节的紊乱。格雷夫斯病Graves’disease毒性弥漫性甲状腺肿被认为是由刺激甲状腺产生过多甲状腺激素的抗体引起的。在毒性结节性甲状腺肿中，甲状腺中的一个或更多个结节产生过多的甲状腺激素，并且不受促甲状腺激素的控制。[0194]继发性甲状腺功能亢进可能很少）由垂体肿瘤垂体肿瘤分泌过多的促甲状腺激素）引起，由垂体对甲状腺激素的耐受性这导致脑垂体分泌过多的促甲状腺激素）引起，或者由女性中的葡萄胎引起。甲状腺暴发为甲状腺突然的极端过度活跃，为一种危及生命需要及时治疗的紧急情况。[0195]甲状腺功能减退为一种其中甲状腺功能不全并且产生过少的甲状腺激素的状况。非常严重的甲状腺功能减退被称为粘液性水肿。在桥本氏甲状腺炎（Hashimoto’sthyroiditis自身免疫性甲状腺炎）中，甲状腺通常肿大，并且甲状腺功能减退产生是由于腺体的功能区逐渐被破坏。甲状腺功能减退的罕见原因包括由甲状腺细胞中的酶异常引起的一些遗传性紊乱。在其他罕见紊乱中，下丘脑或脑垂体无法分泌足以刺激正常甲状腺功能所需的激素。[0196]甲状腺炎的其他实例为沉默性淋巴细胞性甲状腺炎、桥本氏甲状腺炎或亚急性肉芽肿性甲状腺炎。[0197]甲状腺癌为甲状腺恶性肿瘤的任何一个四种主要类型：乳头状、滤泡性、未分化anaplastic或髓样。[0198]垂体为一个豌豆大小的腺体，位于脑底部的骨性结构蝶鞍sellaturcica中。[0199]蝶鞍保护垂体，但允许用于扩张的空间很小。如果垂体肿大，蝶鞍具有向上推动的趋势，通常压迫脑携带来自眼睛的信号的区域，可能导致头痛或视力受损。脑垂体具有两个不同的部分:前前部）叶和后（后部）叶。前叶产生分泌最终控制甲状腺、肾上腺和生殖器官卵巢和睾丸）的功能;乳腺产乳泌乳）；和整体身体成长的激素。前叶也产生导致皮肤变暗并抑制疼痛感觉的激素。后叶产生调节水分平衡、刺激哺乳期女性由乳腺产乳（let-downofmilk、刺激子宫收缩的激素。[0200]脑垂体紊乱的实例为空蝶鞍综合征；垂体功能减退（垂体功能减退症underactivepituitarygland;肢端肥大症，其为由生长激素过度分泌引起的过度生长，其几乎总是由良性垂体肿瘤腺瘤）引起;乳溢，其为男性或未哺乳女性中乳汁breastmilk的产生，在两性中最常见的乳溢原因为脑垂体中的产乳素瘤prolactin-producingtumor泌乳素瘤prolactinoma〇[0201]人类KCNK9在以下的内分泌系统组织中高度表达:肾上腺。在以上提及的组织中的表达表明，人类KCNK9或mRNA可以用于诊断内分泌系统紊乱。另外，可以调节人类KCNK9的活性以治疗内分泌系统紊乱。[0202]癌症[0203]在该定义的范围内的癌症包括哺乳动物中的器官或组织的任何疾病，其特征在于该组织中正常或异常细胞的不良控制或不受控制的增殖及其对整个身体的影响。在该定义范围内的癌症疾病包括良性赘生物、发育不良、增生以及显示转移性生长或任何其他转化的赘生物，如，例如，粘膜白斑病，其通常在癌症爆发之前发生。当细胞和组织生长比正常细胞生长更快时，它们为癌性的，代替或扩散到周围的健康组织或身体的任何其他组织被称为转移性生长，假设其呈现异常形状和大小，显不其核质比nucleocytoplasmaticratio变化、核多染色性，并且最后可能终止。当引起副肿瘤综合征时或如果癌症发生在重要的器官或组织内时，癌性的细胞和组织可能影响整个身体，正常功能将受损或停止，可能导致致死性结果。重要器官对原发性或转移性癌症的最终参与可能导致受影响的哺乳动物的死亡。癌症具有扩散的趋势，并且其扩散的程度通常与个体从疾病存活的机会相关。癌症通常被认为处于三个阶段的生长之一：早期或局部化，在那时肿瘤仍然被限制在起源组织或原发部位;直接延伸，其中来自肿瘤的癌细胞已经侵入到相邻组织或已经仅扩散至区域淋巴结;或转移，其中癌细胞已经经由血液或淋巴系统从原发部位迀移至身体的远端部分，并且已经建立了感染的继发位点。癌症因为其如果不治疗则引起死亡的倾向被称为是恶性的。良性肿瘤通常不会引起死亡，但如果凭借它们的位置、大小或副肿瘤副作用干扰正常的身体功能，它们可能会。因此，根据癌症的定义，良性肿瘤也落入该定义范围内。通常，癌细胞以比正常细胞高的速率分裂，但癌性组织与正常组织的生长之间的区别与其说是前者中的细胞分裂的快速，不如说是癌细胞中的生长限制的部分损失或完全损失以及它们无法分化为具有功能平衡的正常组织生长的特征的有用的、有限的组织类型。癌组织可以表达某些分子受体，并且可能受宿主的易感性和免疫力的影响，并且例如已知乳腺和前列腺的某些癌症被认为是依赖于特定的激素而存在fortheirexistence。根据定义的范围，术语“癌症”不限于简单的良性赘生物，而是包括任何其他良性和恶性赘生物，如1癌、2肉瘤、3癌肉瘤、4造血组织癌（Cancersoftheblood-formingtissues、5包括脑的神经组织的肿瘤、6皮肤细胞癌。根据1的癌症发生于上皮组织中，该上皮组织覆盖器官，例如，诸如，乳腺、肺、呼吸系统和胃肠道、内分泌腺以及泌尿生殖系统的外体皮肤）以及衬粘膜和内腔结构。导管或腺元件可以存在于上皮肿瘤中，如存在于腺癌如，例如甲状腺腺癌、胃腺癌、子宫腺癌中。皮肤以及某些粘膜的铺列细胞上皮pavement-cellepithelium的癌症，诸如，例如舌、唇、喉、膀胱、子宫颈或阴茎的癌症可以被定义为各自组织的表皮样癌或鳞状细胞癌，并且也在癌症定义的范围内。根据2的癌症在结缔组织，包括纤维组织、脂肪的adipose脂肪（fat组织、肌肉、血管、骨和软骨中发展，如，例如，骨原性肉瘤；脂肪肉瘤、纤维肉瘤、滑膜肉瘤。根据3的癌症为在上皮和结缔组织两者中发展的癌症。在该定义范围内的癌症疾病可以是原发性或继发性的，其中原发性的表明癌症起源于其被发现处的组织，而不是从另一病变通过转移作为继发部位被建立的。在该定义范围内的癌症和肿瘤疾病可以是良性或恶性的并且可以影响哺乳动物身体的所有解剖结构。癌症和肿瘤疾病可以包括例如但不限于以下的癌症和肿瘤疾病：1骨髓和骨髓来源细胞（白血病），Π内分泌腺及外分泌腺如例如甲状腺、甲状旁腺、垂体、肾上腺、唾液腺、胰腺、乳腺，如例如在男性或女性乳腺中的良性或恶性肿瘤，乳腺导管，111腺癌、髓样癌、粉刺癌、乳头佩吉特病Paget’sdiseaseofthenipple、年轻女性炎性癌，IV肺，V胃，VI肝和脾，VII小肠，VIII结肠，IX骨及其支撑和结缔组织，如恶性或良性骨肿瘤，例如恶性骨原性肉瘤、良性骨瘤、软骨肿瘤；如恶性软骨肉瘤或良性软骨瘤;骨髓瘤如恶性骨髓癌或良性嗜酸性肉芽月中，以及来自在身体其他位置处的骨组织的转移性肿瘤;X口腔、咽喉、喉和食道，XI膀胱以及男性和女性的泌尿生殖系统的内部和外部器官和结构，如卵巢、子宫、子宫颈、睾丸和前列腺，XII前列腺，XIII胰腺，如胰腺导管癌;XIV淋巴组织如淋巴瘤及其他淋巴起源的肿瘤，XV皮肤，XVI属于呼吸和呼吸系统包括胸肌和衬层的所有解剖结构的癌症和肿瘤疾病，XVII淋巴结原发性或继发性癌，XVIII舌和硬腭或鼻窦的骨性结构，XIX口、颊、颈和唾液腺，XX血管，包括心脏及其衬层，XXI平滑肌或骨骼肌及其韧带和衬层，XXII外周神经系统、植物性神经系统、包括小脑的中枢神经系统，XXIII脂肪组织。[0204]人类KCNK9在以下癌组织中高度表达:食管肿瘤、结肠肿瘤、回肠肿瘤、肺肿瘤、卵巢肿瘤、乳腺肿瘤、肾肿瘤。在以上提及的组织中的表达，并且特别是病变组织食管肿瘤和健康组织食管之间、病变组织结肠肿瘤和健康组织结肠之间、病变组织回肠肿瘤和健康组织回肠之间、病变组织肺肿瘤和健康组织肺之间、病变组织卵巢肿瘤和健康组织之间、病变组织乳腺肿瘤和健康组织乳腺之间、病变组织肾肿瘤和健康组织肾之间的差异表达表明，人类KCNK9或mRNA可以用于诊断癌症。另外，可以调节人类KCNK9的活性以治疗癌症。[0205]炎性疾病[0206]炎性疾病包括由免疫系统或组织的细胞或非细胞介质触发的，引起身体组织炎症并随后产生急性或慢性炎性状况的疾病。此类炎性疾病的实例为I-IV型超敏反应，例如但不限于包括哮喘的肺超敏疾病，特应性疾病，过敏性鼻炎或结膜炎，眼睑血管性水肿，遗传性血管水肿，抗受体超敏反应以及自身免疫性疾病，桥本氏甲状腺炎、系统性红斑狼疮、古德帕斯彻氏综合症^Goodpasture’ssyndrome、天疱疮、重症肌无力、格雷夫斯病和雷诺氏病Raynaud’sdisease、B型胰岛素耐受糖尿病、类风湿性关节炎、银肩病、克罗恩病、硬皮病、混合型结缔组织病、多肌炎、结节病、肾小球肾炎、急性或慢性宿主抗移植物反应。[0207]人类KCNK9在以下免疫系统组织和响应于免疫系统组分的组织以及以下响应于炎症介质的组织中高度表达：回肠慢性炎症、肺C0PD。在以上提及的组织中的表达，并且特别是病变组织回肠慢性炎症和健康组织回肠之间、病变组织肺coro和健康组织肺之间的差异表达表明，人类KCNK9或mRNA可以用于诊断炎性疾病。另外，可以调节人类KCNK9的活性以治疗炎性疾病。[0208]与肺相关的紊乱呼吸系统紊乱）[0209]哮喘被认为是由于多种遗传和环境因素之间的相互作用而产生的，且其特征在于三个主要特征：1由支气管收缩引起的间歇性和可逆性气道阻塞，增加的粘液产生，和气道壁增厚，导致气道变窄，2气道高反应性，以及3气道炎症。某些细胞对哮喘的炎性反应至关重要，并且它们包括T细胞和抗原呈递细胞、产生IgE的B细胞、以及肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和其他结合IgE的细胞。这些效应细胞积累在气道中的过敏反应部位处，并且释放有助于急性病理学并最终导致与紊乱相关的组织破坏的毒性产物。其他驻留细胞，诸如平滑肌细胞、肺上皮细胞、粘液产生细胞和神经细胞也可以在患有哮喘的个体中为异常的，并且可有助于其病理学。尽管临床表现为间歇性喘息和呼吸短促的哮喘的气道阻塞通常为需要立即治疗的疾病的最迫切症状，但与疾病相关的炎症和组织破坏可以导致不可逆的变化，该不可逆的变化最终使哮喘成为需要长期管理的慢性和致残紊乱disablingdisorder〇[0210]慢性阻塞性肺或气道疾病COPD为一种生理学上被定义为气流阻塞的状况，通常起因于肺气肿和由于慢性支气管炎引起的外周气道阻塞的混合[Botstein，1980]。肺气肿的特征在于破坏肺泡壁，导致肺空气空间异常肿大。慢性支气管炎临床上被定义为连续两年的每一年中持续3个月的慢性排痰性咳嗽的存在。在COPD中，气流阻塞通常为渐进的，并且仅部分地可逆。迄今，发展coro的最重要的风险因素为吸烟，但该疾病也确实发生于非吸烟者中。[0211]人类kcnk9在以下的呼吸系统组织中高度表达:肺、肺肿瘤、肺coro。在以上提及的组织中的表达，并且特别是病变组织肺COPD和健康组织肺之间的差异表达表明，人类KCNK9或mRNA可以用于诊断呼吸系统疾病。另外，可以调节人类KCNK9的活性以治疗那些呼吸系统疾病。[0212]与泌尿学相关的疾病[0213]泌尿生殖系统紊乱包括构成女性和男性泌尿生殖系统的器官的良性和恶性紊乱、肾疾病如急性或慢性肾衰竭、免疫介导的肾疾病如肾移植排斥、狼疮性肾炎、免疫复合性肾疾病、肾小球病、肾炎、毒性肾病、阻塞性尿路病obstructiveuropathies如良性前列腺增生ΦΡΗ、神经源性膀胱综合征，尿失禁如冲动性-、压力性-或溢流性-失禁、盆腔疼痛和勃起功能异常。[0214]人类KCNK9在以下泌尿系统组织中高度表达：背根神经节、脊髓、阴茎、海绵体corpuscavernosum、肾、肾肿瘤。在以上提及的组织中的表达表明，人类KCNK9或mRNA可以用于诊断泌尿系统紊乱。另外，可以调节人类KCNK9的活性以治疗泌尿系统紊乱。[0215]人类KCNK9在背根神经节组织中高度表达。在背根神经节中的表达表明，人类KCNK9或mRNA可以用于诊断作为泌尿系统紊乱的失禁。背根神经节参与泌尿系统的神经调节。另外，可以调节人类KCNK9的活性以治疗但不限于失禁。[0216]人类KCNK9在以下的脊髓组织中高度表达:脊髓。在脊髓组织中的表达表明，人类KCNK9或mRNA可以用于诊断作为泌尿系统紊乱的失禁。脊髓组织参与泌尿系统的神经调节。另外，可以调节人类KCNK9的活性以治疗但不限于失禁。[0217]本发明公开的主题提供了用于心血管疾病、内分泌系统疾病、胃肠道疾病、癌症、炎症、血液疾病、神经系统疾病、泌尿系统疾病和呼吸系统疾病的预防和治疗方法两者。[0218]通常，活性剂或药物递送装置的“有效量”或“治疗有效量”指引起所期望的生物学响应所需的量。如将由本领域普通技术人员所理解的，剂或装置的有效量可以取决于此类因素而变化:如所期望的生物学终点、待递送的剂、包封基质的组成、靶组织等。[0219]在一些实施方案中，受试者患有或疑似患有癌症。在一些实施方案中，该方法还包括将有效量的常规癌症治疗施用至受试者。常规癌症治疗的实例包括，但不限于，化学疗法、放射疗法、免疫疗法、质子疗法、光动力疗法和手术。[0220]如本文使用的，术语“免疫治疗剂”指可以通过诱导、增强或抑制细胞、组织、器官或受试者中的免疫应答来帮助治疗疾病的分子。[0221]如本文使用的，“放射治疗剂”和“放射疗法”可互换使用，并且指在癌症治疗的治疗领域中常规采用的那些剂，并且包括具有足够能量以用于化学键电离的光子，诸如，例如，来自放射性细胞核的阿尔法（.α.、贝塔（.β.和伽玛（.γ.射线以及X-射线。放射可以是高LET线性能量传输或低LET^ET为每单位长度的距离传输的能量。高LET被认为是密集的电离放射且低LET被认为是稀疏的电离放射。高LET的代表性实例为中子和α粒子。低LET的代表性例为X-射线和γ射线。包括X-射线和γ射线两者的低LET放射最常用于癌症患者的放射疗法。放射可以用于通常基于门诊患者给予的外部放射疗法或者用于使用非常接近肿瘤或在肿瘤内部放置的放射的内部放射疗法。在内部放射疗法的情况下，放射来源通常密封于称为植入物（implant的小的保持器中。植入物可以呈以下形式:细线、称为导管的塑料管、带状物、胶囊剂、或种子。植入物被直接放入到身体内。内部放射疗法可能需要住院。将电离放射来源作为单位剂量的放射提供，且优选地为X-射线管，因为它提供许多优势，诸如方便调整给药其中来源可以容易地被打开和关闭）、最小的处置问题，等等。放射的剂量单位一般是以戈瑞Gy测量。电离放射源还可以包括放射性同位素，诸如固体放射性同位素来源例如，线、带、颗粒pellet、种子、珠等），或液体放射性同位素填充球囊。在后一种情况下，球囊被专门配置为防止放射性同位素材料从该球囊泄漏进入体腔或血流。仍更进一步地，电离放射来源可以包括在导管主体内的容器，用于接收放射性同位素材料如颗粒或液体。可以为发射α、β和γ选择放射性同位素材料。通常，α和β放射为优选的，因为它们可以通过周围组织迅速吸收，并且基本上不会穿透超出正在接受治疗的体腔的壁。因此，心脏和邻近治疗区域的其他器官的偶然照射可以基本上被消除。提供的单位的总数目将是由本领域技术人员在使用电离放射治疗中确定的治疗有效的量。该量将随受试者和正治疗的恶性肿瘤或赘生物的类型而变化。量可以变化，但患者可以在几个星期内接受的剂量为约30-75Gy。[0222]预期与至少一种代谢重编程剂、至少两种代谢重编程剂或至少三种代谢重编程剂组合使用的示例性放射治疗剂包括引起DNA损伤的因素，诸如γ-射线、X-射线，和或将放射性同位素定向递送至肿瘤细胞。还预期了其他形式的DNA损伤因素，诸如微波和UV照射。X-射线的剂量范围为范围从长时间段3-4周）的50-200伦琴的每天剂量到2000-6000伦琴的单剂量。放射性同位素的剂量范围变化很大，并且取决于同位素的半衰期、发射的放射的强度和类型，以及靶细胞的吸收。在一些实施方案中，放射治疗剂选自由以下组成的组：47Sc,67Cu,90Y,109Pd,1231,1251,1311,186Re,188Re,199Au,211At,212Pb,212B,3W3P^71Ge,77As,103Pb,105Rh,111Ag,119Sb,121Sn,131Cs,143Pr,161Tb,177Lu,191Os,193MPt,197H,43K,52Fe,57Co,67Cu、67Ga、68Ga、77Br、81Rb·81MKr、87MSr、99MTc、111In、113MIn、127Cs、129Cs、132I、197Hg、203Pb和206Bi，如在美国专利第8，946，168中描述的，其整体通过引用并入本文。[0223]如本文使用的，“光动力疗法photodynamictherapy”（也称为光放射疗法、光线疗法和光化学疗法指使用光敏剂与光组合杀死癌细胞的治疗。光敏剂在光活化后杀死癌细胞。[0224]如本文使用的，“质子疗法protontherapy”（也称为质子束疗法指使用质子束照射并杀死癌细胞的治疗。[0225]在一些实施方案中，受试者为人类。[0226]本发明公开的主题还涉及用于实践本发明公开的主题的方法的试剂盒，以及包含本发明公开的主题的抗体、抗体片段或其衍生物，编码所述组分的核酸分子和或本发明公开的主题的载体的试剂盒。[0227]通常，本发明公开的试剂盒包含一些或所有组分、试剂、供应品等以实践根据本发明公开的主题的方法。在一些实施方案中，术语“试剂盒”指包含以下的任何预期的任何制品（articleofmanufacture例如，包装或容器）：至少一种抗体、抗体片段或其衍生物，包含至少一种抗体、抗体片段或其衍生物的药物组合物或诊断组合物，以及一组用于实践本发明公开的主题的方法的特定说明。试剂盒可以被包装在分开的或不分开的容器中，诸如纸箱、瓶、安瓿、管等。本发明公开的组合物可以以干燥、冻干或液体形式包装。提供的另外的组分可以包括用于重构干燥组分的媒介物。优选地，所有此类媒介物为无菌的和不致热的，使得它们适用于注射到受试者中而不引起不良反应。本领域技术人员将理解，可以组装试剂盒以用于治疗本文描述的任何癌症或实体肿瘤。[0228]涵盖本文公开的化合物的所有实施方案可以作为单个化合物使用或以组合使用以用于制备药物。[0229]尽管在本文中使用了特定的术语，但它们仅以一般的和描述性的含义并且不是为了限制的目的被使用。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明描述的主题所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。[0230]遵循长期存在的专利法公约，术语“一a”、“一an”、和“该the”当用于本申请包括权利要求书时指的是“一个或更多个”。因此，例如，提及“一个受试者asubject”包括多个受试者，除非上下文清楚地是意思相反的例如，多个受试者），等等。[0231]贯穿本说明书和权利要求书，术语“包含（comprise”、“包含（comprises”和“包含comprising”以非排他的含义使用，除了在上下文另外要求的情况下。同样地，术语“包括include”和其语法变体旨在非限制，使得列表中项目的列举不排除可被取代或添加至所列项目的其他类似的项目。[0232]为了本说明书和所附权利要求书的目的，除非另有指示，在说明书和权利要求书中使用的表示量、大小、尺寸、比例、形状、制剂、参数、百分比、参数、数量、特征和其他数值的所有数目应当被理解为在所有情况下被术语“约”修饰，即使术语“约”可能没有明确地与该值、量或范围一起出现。因此，除非相反指示，在以下说明书和所附权利要求书中提出的数值参数不是并且不需要是精确的，但可以是近似的和或按需要是较大或较小的，这反映容差、转换因子、四舍五入、测量误差等、以及本领域技术人员已知的其他因素，取决于旨在通过本发明公开的主题获得的期望的性质。例如，当术语“约”指值时能够用意在于包括与特定的量在一些实施方案中±100%、在一些实施方案中±50%、在一些实施方案中土20%、在一些实施方案中±10%、在一些实施方案中±5%、在一些实施方案中±1%、在一些实施方案中±0.5%、以及在一些实施方案中±0.1%的差异，因为此类差异对于进行所公开的方法或采用所公开的组合物是适当的。[0233]此外，当与一个或更多个数值或数值范围结合使用时，术语“约”应理解为指所有此类数值，包括范围内的所有数值以及通过将边界延伸至高于和低于所列出的数值修改该范围。通过端点叙述的数值范围包括被归入该范围内的所有的数，例如，全部整数，包括其分数例如，叙述的1至5包括1、2、3、4和5以及其分数，例如1.5、2.25、3.75、4.1及类似的）以及在该范围内的任何范围。实施例[0234]包括以下实施例以向本领域普通技术人员提供指导以用于实践本发明公开的主题的代表性实施方案。根据本公开内容和本领域中的一般技术水平，技术人员可以理解，以下的实施例意图仅是示例性的并且可以使用许多变化形式、修改形式和改变形式而不偏离本发明公开的主题的范围。以下的合成描述和具体实施例仅意图用于说明的目的，并且不应被解释为以任何方式限制通过其他方法制成本公开内容的化合物。[0235]实施例1[0236]挺塗[0237]双孔结构域钾K2P通道用于维持细胞静息膜电位-一种许多生物过程的前提条件。KCNK9K2P家族的一个成员）由于其在多种人类肿瘤中的过表达及其促进肿瘤细胞存活和生长的能力而牵涉在癌症中。然而，由于特异性调节物的缺乏，KCNK9对恶性肿瘤的潜在贡献仍然难以捉摸。这里描述了针对KCNK9细胞外结构域的新的单克隆抗体mAb的开发及其功能作用。显示，一种mAbY4，以最高亲和力的结合，通过诱导内化来抑制通道活性。当对表达KCNK9的细胞测试时，Y4降低细胞存活力；增加细胞死亡并触发补体依赖性细胞毒性。该抗体的全身性施用有效抑制小鼠中的人类肺癌异种移植物和鼠乳腺癌转移。这些研究揭示了，基于mAb的KCNK9靶向为表达KCNK9的恶性肿瘤的治疗策略。此外，本发明公开的基于mAb的策略通常应该适用于研究其他离子通道。[0238]材料和方法[0239]试剂:抗体从以下来源获得：小鼠抗人类生长激素抗体Abeam、兔抗KCNK9抗体Alomone、山羊抗KCNK9抗体SantaCruz、小鼠抗β-肌动蛋白抗体、兔抗活化态胱天蛋白酶-3CellSignaling、兔抗Ki67抗体（Abeam、和APC-缀合的山羊抗小鼠IgG抗体Biolegend。同种型匹配的小鼠IgGlmlgGl对照来自SouthernBiotech。抗KCNK9mAb使用快速ELISA小鼠mAb同种型化试剂盒（RapidELISAMousemAbIsotypingKitPierce进行同种型化。K2P通道的瞬时转染使用Fugene6Promega来进行。[0240]细胞培养:将HEK293、C0S-7、BEN鳞状细胞肺癌细胞DSMZ,Germany和MDA-MB-231乳腺癌细胞来自SaraSukumar博士的惠赠在补充有10%胎牛血清FBS和2mML-谷氨酰胺L-Gln的Dulbeccos修改的eagle培养基DMEM中生长。HEK293-KCNK9稳定细胞系为先前产生的（Miller等（2012ProbeReportsfromtheNIHMolecularLibrariesProgram[Internet]，并且KCNK9的表达通过与ΙμΜ四环素孵育16小时来诱导。将这些细胞在补充有10%FBS、2mM谷氨酰胺、400ygml潮霉素和15ygml杀稻瘟素的DMEM中培养。将ΒΤ-549乳腺癌细胞来自SaraSukumar博士的惠赠在补充有10%FBS和2mML-Gln的RPMI-1640培养基中维持。将410和410.4鼠乳腺癌细胞来自AmyFulton博士的惠赠在补充有10%FBS、2mML-Gln、0.15%wv碳酸氢钠和ΙΟΟμΜMEM非必需氨基酸的DMEM中培养。将所有细胞在5%C02中于37°C维持。[0241]QRT-PCR、蛋白印迹和流式细胞术:来自细胞系和快速冷冻的肿瘤组织的总RNA分别遵循制造商的说明使用RNeasy微型试剂盒RNeasyMiniKitQiagen和TRIZOL试剂TRIZ0LReagentInvitrogen来提取。如先前描述的进行QRT-PCRLopez-Bertoni等2014Oncogene。将每一个基因的相对表达对人类18SrRNA或小鼠GATOHRNA归一化。所有引物对的序列列于表1中。[0242]如先前描述的提取蛋白（Lopez-Bertoni等（2014Oncogene。蛋白印迹根据制造商的说明使用定量蛋白印迹系统LI-CORBioscience来进行。第二抗体用IRDye红外染料LI-C0RBiosciences来标记。[0243]将单细胞悬浮液在4°C用抗KCNK9mAb抗体标记30分钟。在用冰冷的I3BS洗涤之后，将细胞与APC缀合的山羊抗mlgG第二抗体在4°C孵育30分钟。然后洗涤染色的细胞并使用FACSCalibur流式细胞仪G3DBiosciences进行分析，或使用FACSAria-Π流式细胞仪BDBiosciences进行分选。[0244]表1·QRT-PCR引物序列[0247]抗体产生和纯化:产生针对哺乳动物表达载体中重组表达的hKCNK9的第一细胞外结构域（MlPl氨基酸30〜88的鼠单克隆抗体（mAb，并随后将其亲和纯化用于免疫Leahy等（2000ProteinExpressionandPurification20,500-506;Chapoval等（2002MolBiotechnol21,259-264。在获得杂交瘤之后，进行多轮有限稀释克隆。在亚克隆的每一个阶段，将来自杂交瘤的培养物上清液使用重组hKCNK9MlPl和hKCNK3MlPl通过酶联免疫吸附测定ELISA筛选。选择对hKCNK9MlPl特异性的具有最高ELISA滴度的克隆用于通过流式细胞术分析进一步筛选瞬时表达重组hKCNK9MlPl-eGFP的HEK293T细胞的染色。该筛选策略旨在获得以高亲和力结合hKCNK9MlPl结构域的单克隆。遵循制造商的建议，将选择的克隆放大并使用蛋白G琼脂糖珠Pierce纯化mAb。所有mAb均为IgGl亚型。[0248]抗体-抗原结合表征:MAb特异性通过蛋白印迹基于与9个重组hK2PMlPl亚型的交叉反应性来检查，并且通过流式细胞术分析瞬时转染了全长hKCNK9及其紧密相关的K2P亚型-hKCNK3的细胞的染色来进一步验证。与重组人类和鼠KCNK9M1P1结合的亲和力使用Octets系统PallLifeSciences来确定。Kd通过从实时测量得到缔合Kcin和解离Koff常数来估计并通过以下来计算:Kd=KonKrff。[0249]基于铊ΤΓ的荧光测定:将先前开发用于高通量筛选KCNK9的小分子调节物的荧光测定调整用于检查mAb的功能作用（Weaver等（2004JournalofBiomolecularScreening9,671_677;Miller等（2012ProbeReportsfromtheNIHMolecularLibrariesProgram[Internet]。在该测定中，Tl+用作K+的替代离子。在四环素诱导KCNK9表达后，将细胞与0.4mgmlmAb在37°C孵育0.5至72小时。在洗涤wash-off之后，将细胞用ΤΓ敏感的荧光染料FluxOR™Invitrogen来装载。通过2.8mMK+活化通道后，ΤΓ内流产生了随时间的变化监测的焚光变化（Miller等（2012ProbeReportsfromtheNIHMolecularLibrariesProgram[Internet]。亲本HEK293和非诱导型HEK293-KCNK9细胞用作阴性对照。[0250]通道内化的流式细胞术分析:将Tet诱导的HEK293-KCNK9细胞与0.4mgmlY-mAb在30°C孵育36小时以诱导胞吞。将保留在质膜上的KCNK9通道用多克隆抗KCNK9抗体染色，随后如以上描述进行第二抗体染色和流式细胞术分析。[0251]通道内化的共焦显微镜分析:在实验之前，将抗KCNK9mAb与AlexaFluor488染料LifeTechnologies缀合。将C0S-7细胞接种到12孔板中的盖玻片上并用hKCNK9或hKCNK3瞬时转染。将Mcherry共转染作为转染对照。在36小时转染之后，将细胞用0.4mgmlY4在4°C处理3小时或在30°C处理12小时。在孵育结束时，将每一个孔用I3BS洗涤。将细胞用4%多聚甲醛固定，用？83洗涤，并用包含0厶？1的卩1-〇1^〇1^%〇11厶11衍€316封固剂0^“Technologies封固。图像以扫描放大1.0以63X1.4来拍摄。对于共定位分析，将C0S-7细胞与RFP加标签的EEAlAddgene共转染，随后进行相同的mAb处理方案。图像以扫描放大1.0以40X1.3来拍摄。图像定量使用Imaris软件Bitplane来进行。选择红色和绿色通道的最小阈值，并分析来自不同的视野的图像。数据表示200个数目的细胞的分析。[0252]细胞周期分析:如先前部分中描述的，将在BEN细胞表面上的hKCNK9通道用Y4和第二抗体标记。然后将细胞固定并用80%乙醇透化，随后进行碘化丙啶PI染色。在流式细胞术分析期间，对K9+和KiT细胞进行门控并收集其相应的PI信号用于分析。[0253]细胞存活力和细胞死亡测定：在10%FBS培养基存在下接种癌细胞系，在37°C过夜。第二天，将细胞用PBS洗涤，并用在0.1%或10^^85培养基中的2.6以1抗体在37°：处理24-72小时。细胞存活力根据制造商的建议，使用细胞计数试剂盒-8CellCountingKit-8DojindoMolecularTechnologies来测量。细胞死亡根据制造商的说明，通过CytoTox96®非放射性细胞毒性测定（CytoTox96®Non_RadioactiveCytotoxicityAssayPromega测量乳酸脱氢酶LDH的释放来确定。将细胞存活力和细胞死亡的百分比对用PBS处理的细胞归一化。[0254]补体依赖性细胞毒性CDC:CDC测定方案根据先前的研究进行调整Konishi等2008ClinicalandVaccineImmunology:CVI15,88_94;Hsu等（2010MolecularCancer9,139。将癌细胞系血清剥夺12小时，并然后用具有或不具有鼠血清补体Rockland的0.4mgml抗体在37°C处理2小时。将来自小鼠的冻干的补体血清重构于PBS中并以1:10至1:1000连续稀释。将包括在56°C热灭活30分钟的补体血清作为阴性对照。细胞死亡如在先前部分中描述的来确定。[0255]异种移植物研究:将雌性6至8周龄nunu小鼠（CharlesRiver通过腹膜内（i.p.注射5mgkg赛拉嗪xylazine来麻醉。对于BEN皮下s.c.异种移植物，使小鼠在背侧s.c.接受在25yLPBS和25yLMatrigelCorning中的4XIO6个BEN细胞。为了监测mAb对肿瘤起始的影响，将小鼠随机分组n=10组），并在第0天开始i.p.接受在IOOyLPBS中的4mgkgY4或同种型匹配的对照，随后一周两次i.p.mAb注射。为了监测mAb对肿瘤进展的影响，在肿瘤达到50mm3之后，将小鼠随机分组n=10组），并一周两次i.p.接受在IOOyLPBS中的4mgkgY4或同种型匹配的对照。肿瘤体积通过测量两个维度[长度a和宽度b]来估计，并使用以下等式计算：V=ab22。在每一个实验结束时，将肿瘤切除用于分析（Lopez-Bertoni等（2014Oncogene〇[0256]转移研究：将雌性4至6周龄BalbcByJ小鼠（JacksonLaboratory随机分组η=10组），并在细胞注射之前通过持续一周的一周两次i.P.接受在IOOyLPBS中的4mgkgY4或同种型匹配的对照来引发。肺定殖通过将2ΧIO5个活的410.4细胞i.v.注射到小鼠的侧尾静脉来评价。然后将小鼠用在IOOyLPBS中的4mgkgY4或同种型匹配的对照一周两次i.p.处理持续25天。将所有小鼠在移植后第25天或者如果为濒死的）更早进行安乐死。在解剖显微镜下检查肺的肿瘤集落。[0257]免疫组织化学：将冷冻切片用抗裂解的胱天蛋白酶-3和抗Ki67抗体染色，如先前描述的（Goodwin等（2011Anti-cancerdrugs22,905-912。使用生物素化的缀合的第二抗体、随后与3,3~二氨基联苯胺过氧化物酶底物孵育来检测第一Ab。将抗裂解的胱天蛋白酶-3和抗Ki67染色的切片用甲基绿复染。增殖和凋亡指数使用ImageJ软件rsb·info.nih.govij通过计算机辅助定量确定，如先前报道的（Goodwin等（2011Anti-cancerdrugs22,905-912〇[0258]统计分析:两组比较通过t检验或ANOVA分析，并计算P值。除非另有说明，P〈0.05被认为是显著的。示出的所有数据均为平均值土标准偏差。共定位的统计分析通过计算绿色通道和红色通道之间的皮尔逊相关系数Pearson’scoefficientofcorrelation来进行。r0.5被认为是显著的。[0259]介绍[0260]MlPl结构域内的序列在K2P亚型中保守性差（图1C，代表期望的细胞外表位储库。原因是ProvidedthatMlPl结构域携带重要的调节位点（Clarke等（2008JournalofBiologicalChemistry283,16985-16992；Lotshaw2007CelIBiochemistryandBiophysics47,209-256。假设，针对MlPl结构域产生的抗体允许高度选择性地操作KCNK9功能。在该研究中，针对KCNK9细胞外结构域开发了一种抑制性抗体。对基于抗体的KCNK9靶向进行表征，并且发现其有效抑制癌细胞存活、肿瘤生长和转移。本发明公开的主题提供了首次报道的离子通道靶向单克隆抗体，其显示显著的体内治疗效果。本发明公开的主题还涉及其他相关通道及其在健康和疾病中的用途。[0261]题[0262]MlPl结构域靶向抗体抑制了KCNK9通道活性:为了产生重现天然hKCNK9结构的抗原，MlPl结构域（图1B、图1C作为重组蛋白在CHO-S和HEK293T细胞中表达以优化3-D结构呈递和翻译后修饰（图1D、图2A、图2B。成功产生了40种鼠单克隆抗体。其中，4种mAb针对hK9MlPl-mIgG，被命名为YiAb，且36种针对hGH-hK9MlPl，被命名为H-mAb。所有mAb均为IgGl亚型，并相比于其他K2P亚型（包括在K2P成员中与KCNK9最密切相关的hKCNK3表现出与hKCNK9的亚型特异性结合（图3A、图3B、图4。发现Y-mAb显示出与重组hKCNK9抗原结合的纳摩尔级至亚纳摩尔级的亲和力，其中Y4具有最高亲和力Kd〜0.7nMJ-mAb还以较低亲和力与重组鼠KCNK9mKCNK9MlP1结构域交叉反应（图3C、图3D、图5。在Y-mAb之间的交叉反应性的程度不同。人类和鼠KNCK9M1P1结构域相差仅5个氨基酸（图1C，提供了对由Y-mAb识别的独特表位的理解。[0263]为了测试Y-mAb和H-mAb对hKCNK9通道的影响，使用先前开发用于hKCNK9化学筛选的基于铭（Tl+的焚光离子通量（ion-flux测定（Weaver等（2004JournalofBiomolecularScreening9，671_677;Miller等（2012ProbeReportsfromtheNIHMolecularLibrariesProgram[Internet]。在该测定中，记录的焚光信号与细胞表面上的开放K+通道的数目成比例（图6A。在Tl+测定中使用的表达hKCNK9的HEK293细胞的表面上，12种mAb显示阳性染色（图6B。预孵育方案后，这12种mAb中的6种有效抑制hKCNK9电导。这种响应不是由于如在荧光测量的时间O时的可比较的荧光强度所指示的细胞存活力的差异（图6C、图7A、图7B、图7C。其中，Y4最有效，在36小时的mAb孵育之后显示出多达30%的Tl+信号抑制。因此，选择Y4进行后续研究。时间过程实验表明，Y4介导的通道抑制在更长的暴露之后更强（图6C、图6D、图8并且依赖于mAb浓度（图6E。还使用电生理测定检查mAb对通道电导的急性影响，并且没有mAb显示对hKCNK9活性的可检测的影响（图9A、图9B。[0264]Y4通过诱导细胞表面的通道胞吞抑制KCNK9:Y4介导的通道抑制的时间依赖性暗不Ab诱导的胞吞机制（Bhattacharyya等（2010ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences107,14541-14546；Mendelsohn1997ClinicalCancerResearch3,2703-2707;Molina等（2001CancerResearch61,4744-4749。流式细胞术用于检查这种可能性。将过表达hKCNK9的C0S-7细胞与抗体在37°C孵育12小时，并且将细胞表面上的剩余通道使用多克隆兔抗hKCNK9抗体来染色。流式细胞术分析显示Y4处理的细胞中的表面染色降低，但在用其他测试的mAb处理的细胞中未降低（图IOA、图IOB、图10C，支持由Y4诱导的胞吞。为了进一步分析，将共焦显微术用于追踪荧光标记的Y4J4的荧光缀合不改变其与hKCNK9的结合亲和力（图11A、图11B。在与表达hKCNK9的细胞孵育后，仅在允许胞吞的温度观察到表面信号的一致减少以及增加的细胞内信号主要在核周区域可见）。内化的Y4与早期内体标志物EEAl共定位（图6F。由于在表达hKCNK3的细胞中未检测到变化，这种现象是hKCNK9特异性的（图6F。总之，这些数据表明，离子内流测定中降低的细胞表面通道活性是由于mAb诱导的内化和胞吞。[0265]Y4识别癌细胞系中表达的内源KCNK9:已经报道在约30%的乳腺癌和肺癌患者中存在KCNK9基因组扩增和蛋白过表达Mu等（2003CancerCell3,297-302JCNK9的强制表达促进小鼠胚胎成纤维细胞的肿瘤增殖能力，并且这种转化被显性负性KCNK9突变体消除，表明KCNK9在肿瘤生长期间的作用Mu等（2003CancerCell3,297-302;Pei等（2003ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences100,7803-7807。为了评价KCNK9的临床相关性，使用公布的数据集来分析KCNK9表达和患者存活之间的相关性。KCNK9的高表达与患有鳞状细胞肺癌和乳腺癌的患者的总体存活期缩短显著相关。发现KCNK3表达和患者存活之间无显著相关性（图12A。这支持KNCK9促进肿瘤生长并且可能是表达KCNK^9癌症的治疗靶的见解。[0266]鉴于Y4以K2P亚型特异性方式结合并抑制hKCNK9，Y4介导的通道调节提供了一种研究内源KCNK9在癌症生物学中的作用的有利的策略。先前证明了BEN鳞状细胞肺癌细胞系在mRNA水平大量表达hKCNK9Pei等（2003ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences100,7803-7807。这使用Y4在蛋白水平上得到证实（图12B。随后，通过qRT-PCR筛选一组人类和鼠癌细胞系（图13A，随后进行经由蛋白印迹和流式细胞术分析的确认，以鉴定具有高hKCNK9表达的细胞系。除了BEN以外，发现BT-549乳腺癌细胞系和来自LX22患者来源的小细胞肺癌异种移植的细胞以相对高水平表达hKCNK9。另一方面，MDA-MB-231乳腺癌细胞系具有不可检测的通道表达，并被选择作为阴性对照（图12B。在转移性和非转移性鼠乳腺癌细胞系中发现了鼠KCNK9mKCNK9的表达（图13B。在两种转移性细胞系66.1和410.4中发现了较高的表达水平，表明KCNK9在转移中的潜在作用，这先前尚未被研究过。Y4染色的410.4细胞指示与mKCNK9具有足够的交叉反应性（图12B。有趣的是，BEN和BT-549细胞系两者均显示基于hKCNK9的表面染色的两个细胞群，被命名为K9+细胞和Κ9_细胞（图14。为了检查这两个亚群之间除了hKCNK9表达以外是否还具有任何内在的差异，进行细胞周期分析，并且与K9_BEN亚群相比，K9+BEN亚群在S+G2M期显示34%的细胞富集（图12C。这表明，hKCNK9表达和或功能与细胞周期进程相关。事实上，已报道了钾通道显示出细胞周期时相依赖性cellcyclephase-dependent的表达、定位和功能，这继而调节细胞周期进程和增殖（HuangJan2014TheJournalofCellBiology206,151-162。[0267]通过Y4抑制KCNK9降低了细胞存活力并增加细胞死亡：经由显性负性突变体或shRNA的强制表达抑制KCNK9已被证明将癌细胞系的增殖抑制了25%〜65%Pei等（2003ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences100,7803-7807;Kosztka等（2011MelanomaResearch21,308-322。类似于Y4对诱导HEK293中转基因hKCNK9的内化的影响，我们发现，在BEN细胞系中Y4诱导内源KCNK9的内化，其中KCNK9阳性细胞降低21.7%，且KCNK9阳性细胞总荧光降低9.8%。为了评价Y4介导的hKCNK9功能的调节是否导致任何生物学结果，将BEN、BT-549、MDA-MB-231、LX22和410.4细胞在10%血清或0.1%血清中用抗体处理24-72小时。0·4mgml的Y4显著抑制K9+BEN、BT-549、LX22和410·4细胞的存活力，但不抑制Κ9ΈΕΝ或MDA-MB-231细胞的存活力（图12D。与来自使用人类癌细胞系的结果一致，Y4也有效抑制410.4细胞存活力并增加其细胞死亡（图12D。与先前的报道一致，K9+BEN细胞和LX22细胞的抑制在0.1%血清时更突出，显示KCNK9突变体在低血清中的更显著的作用。[0268]细胞存活力的变化可以是由于细胞增殖、细胞死亡或代谢的改变。为了进一步剖析Y4的生物学效应，通过测量来自在mAb处理之后的细胞的L-乳酸脱氢酶LDH释放来检查Y4对细胞死亡的影响。Y4诱导K9+BEN、BT-549、LX22和410.4细胞的显著细胞死亡。在K9_BEN或MDA-MB-231细胞中未检测到LDH的显著释放（图12E。这表明，观察到的细胞存活力降低可归因于由Y4触发的细胞死亡的增加。存活力效应与靶丰度的相关性与KCNK9特异性机制一致。[0269]鼠IgGl同种型具有介导效应物功能的能力。为了研究Y4是否能够引起补体依赖性细胞毒性CDC，将细胞与Y4在连续稀释的鼠补体的存在下孵育2小时，并根据LDH释放测量细胞毒性。Y4有效诱导针对K9+BEN和BT-549细胞的⑶C。这种效应物响应依赖于补体浓度，而在Κ9ΈΕΝ细胞中或者如果补体被热灭活，未发现作用（图12E。[0270]Y4抑制体内肿瘤生长:为了研究基于mAb的KCNK9靶向的治疗作用，将4mgkg的Y4在BEN皮下植入的同一天（以监测mAb在肿瘤起始期间的作用或在形成可见肿瘤之后（以监测mAb对已建立的肿瘤的作用腹膜内（i.p.施用至裸小鼠。Y4有效地抑制了两种实验设计中的肿瘤生长图15A、图15FJ4的全身性施用在小鼠中耐受性良好，如通过体重无明显变化表明的（图15B、图15G。分别将Ki67和裂解的胱天蛋白酶-3免疫组织化学用于确定肿瘤生长速率的差异是否起因于降低的细胞增殖或增加的凋亡。与mlgGl处理的肿瘤相比，用Y4处理的肿瘤显示较低的增殖指数和较高的凋亡指数（图15C、图15D、图15H、图151。来自Y4处理的肿瘤的蛋白提取也显示出减少的hKCNK9图15E、图15J。我们验证了LX22—种高度侵袭性的患者来源的小细胞肺癌异种移植物模型）中的Y4的体内作用，并发现对肿瘤生长抑制、增殖指数降低和KCNK9下调的相似结果（图15K、图15L、图15M和图15N。这些结果表明，Y4处理能够通过影响增殖和或凋亡来阻碍肿瘤生长，并且它下调肿瘤相关的KCNK9。[0271]Y4抑制体内转移：鉴于Y4可以引起⑶C，除了经由抗体-抗原相互作用的直接杀死以外，通过活化抗肿瘤免疫组分可以获得治疗益处是可行的。Y4与mKCNK9的交叉反应性提供了研究KCNK9在免疫活性模型中的作用并检查Y4诱导的肿瘤细胞免疫靶向的可能性的优势。将410.4细胞注射到免疫活性BALBcByJ小鼠的尾静脉中，并研究Y4对肺转移的影响。基于肺集落的定量，Y4处理的动物显示出显著较少的肺转移，且无可检测的毒性（图16A。这些数据表明，Y4不仅有效针对原发性肿瘤形成，而且有效针对转移。这可以是由于经由KCNK9抑制的直接作用或经由mAb效应物功能的提高的对肿瘤细胞的免疫应答。我们从肺组织中提取mRNA，并表征免疫标志物的表达Arnould等〃Trastuzumab-basedtreatmentofHER2-positivebreastcancer:anantibody-dependentcellularcytotoxicitymechanism?〃Br.J.Cancer94,259-2672006J4处理的小鼠显示出较高的CD56+自然杀伤细胞、粒酶B+细胞毒性T细胞的浸润和增加的T细胞化学引诱物趋化因子C-X-C基序配体-9图16B。我们先前已经证明，趋化因子C-X-C基序配体-9的强制表达通过涉及自然杀伤和T细胞的机制抑制鼠乳腺癌细胞的生长和转移（Walser等，〃ImmuneiediatedmodulationofbreastcancergrowthandmetastasisbythechemokineMigCXCL9inamurinemodel，"J.Immunother.30,490-4982007〇[0272]为了探索Y4诱导免疫效应物响应的潜力，我们进行了体外CDC和ADCC测定。我们将癌细胞与Y4在鼠补体的存在下孵育2h，随后进行LDH测定。Y4有效诱导针对K9+BEN和BT-549细胞的CDC。这种响应依赖于补体浓度，而在K9-BEN细胞中或者如果补体被热灭活，未发现任何作用（图16C。为了研究Y4诱导的ADCC的可能性，我们将BEN细胞与增加浓度的Y4在为了ADCC研究而建立的生物发光的JurkatT-报告物细胞的存在下孵育（Parekh，等，〃Developmentandvalidationofanantibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity-reportergeneassay〃mAbs4,310-3182012。我们发现了ADCC的剂量依赖性诱导，如萤光素酶活性所示（图16D。基于这些体外发现，认为Y4介导的转移抑制可能涉及细胞自主作用和或免疫依赖性途径两者。[0273]为了阐明免疫系统的可能作用，从肺组织提取的mRNA用用于表征由治疗性抗体触发的基于细胞的抗肿瘤响应的免疫标志物进行分析Arnould等（2006BrJCancer94，259-267。¥4处理的小鼠显示出较高的免疫细胞浸润，如通过增加的⑶56+自然杀伤细胞、包括粒酶B+细胞毒性T细胞和CD25+调节性T细胞的T细胞以及T细胞化学引诱物CXCL-9所指示的。这表明，Y4介导的肺转移的抑制可以部分地是由于经由Y4的效应物功能活化抗肿瘤免疫应答。因此，Y4与免疫调节剂或基于细胞的疗法的组合可以产生治疗益处。[0274][0275]本发明公开的主题公开了一种新的基于mAb的策略，其通过诱导通道内化来选择性和有效地抑制KCNK9的功能。另外，使用这一策略，本发明公开的主题公开了KCNK9在促进原发性肿瘤生长和转移中的关键作用。人类基因组编码超过400个离子通道基因。它们的巨大数目和多样性允许离子通道介导广泛的生物学过程，包括神经和肌肉激发、激素分泌、细胞增殖、学习和记忆。因此，离子通道功能的缺陷通常具有深远的生理作用。迄今，已经发现超过60个不同离子通道基因的突变引起人类疾病KullmannWaxman2010TheJournalofPhysiology588,1823-1827。由于这一临床重要性，离子通道构成了第二大类药物革巴Rask-Andersen等（2011NatRevDrugDiscov10,579-590。尽管进行了积极的治疗研究，40%的被表征的离子通道没有已知的配体药物被报道，且剩余的60%的大多数抑制剂是非选择性的。因此，越来越多地关注针对更有选择性的药理学剂（Rask-Andersen等2011NatRevDrugDiscov10,579-590。抗体构成了增长最快的一类治疗剂。针对癌症、自身免疫性和炎性疾病的基于抗体的疗法已经良好建立（Moskal等（2005Neuropharmacology49，1077_1087;Scott等（2012NatRevCancer12,278-287。尽管抗体为用于离子通道研究和结构研究的有效工具，抗体作为离子通道调节物的应用少有研究。这部分地是由于不良的表位可及性、细胞外结构域的特异性以及获得高质量抗原的技术挑战以及用于鉴定功能性抗体的有效筛选策略。这可能是为什么迄今产生的几乎所有的抗体调节物均为具有很少或没有生物活性的多克隆（SunLi2013ActaPharmacolSin34,199-204。[0276]人类乳腺癌和肺癌中的新扩增子的高分辨率映射将KCNK9鉴定为单个过表达的基因。后续分析证实KCNK9在基因组、转录和翻译水平的过表达Mu等（2003CancerCell3，297-302ICNK9的异位表达对其他非致肿瘤性细胞赋予致肿瘤性Mu等（2003CancerCell3,297-302。自从这些初始研究以来，已经在包括乳腺癌、肺癌、黑素瘤和神经胶质瘤细胞系的癌细胞系模型中探索了KCNK9的致癌特性（Pei等（2003ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences100,7803-7807;Kosztka等（2011MelanomaResearch21，308_322;Meuth等（2008JNeurooncol87,263_270;Lee等（2012ActaPhysiologica204,513-524。根据研究的癌症类型和用于操作通道功能的方法，KCNK9对致肿瘤性具有不同的作用。例如，经由显性负性突变体、反义shRNA或非特异性化学阻断剂抑制KCNK9抑制了肺癌、黑素瘤和神经胶质瘤细胞的增殖（Pei等（2003ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences100,7803-7807;Kosztka等（2011MelanomaResearch21,308-322;Meuth等（2008JNeurooncol87,263-270ICNK9在MDA-MB-231乳腺癌细胞中的沉默增加了细胞侵袭和迀移Lee等2012ActaPhysiologica204,513-524。这些差异可以是由于KCNK9在控制细胞生长和迀移中的差别作用、癌症类型差异或脱靶off-target效应。KCNK9能够与KCNK3形成异二聚体。基于突变体和基于shRNA的靶向可干扰KCNK9同二聚体以及KCNK9KCNK3异二聚体的功能，可能导致KCNK9功能的矛盾解释。在这方面，mAb提供了KCNK9同二聚体的优先靶向，条件是Y4不具有可检测的与KCNK3的结合，并且需要高亲和力affinity亲合力avidity结合来诱导胞吞。此外，线粒体KCNK9被报道并与黑素瘤细胞增殖相关（Kosztka等（2011MelanomaResearch21,308-322。细胞外mAb调节允许KCNK9的空间特异性调节。事实上，本报告中使用的HiAb提供了天然KCNK9通道在体内的致癌特性的首次证明且本研究获得了肿瘤生长和转移中一致的肿瘤促进特性。[0277]已经报道了，除了KCNK9以外的多种K+通道在人类癌症中差异地表达，并且调节致肿瘤性的不同方面，包括细胞增殖、迀移和存活HuangJan2014TheJournalofCellBiology206,151-162。然而，与作为细胞信号级联的整体组分的钙离子Ca2+不同，K+离子电导如何控制生物学过程很大程度上仍然是未知的。在非可兴奋性细胞和可兴奋细胞中，静息膜电位通常被维持在负值。K+通道，特别是K2P，微调膜电位使其保持在规定的范围_30mV至-85mV。当多种通道打开时，与静息膜电位相比，膜电位可以超极化以变得更为负性或去极化以变得更为正性。膜电位的变化可以改变细胞生理学，诸如细胞体积动力学，这继而调节细胞增殖、粘附和迀移（HuangJan2014TheJournalofCellBiology206，151-162。例如，Ca2+-活化的K+通道Kca和内向整流K+通道Kir能够调节前缘和后缘的局部细胞体积，以促进癌细胞迀移和侵袭HuangJan2014TheJournalofCellBiology206,151-162。维持静息膜电位对于对电压敏感的蛋白的功能和调节也是至关重要的。例如，通过开放K2P通道引起的超极化可以增加Ca2+的内流并调节细胞周期进程期间的G1-S期转换。在该研究中发现，由Y4诱导的细胞毒性在低血清浓度时更突出，支持先前的研究结果，S卩KCNK9功能保护血清剥夺的微环境中的细胞（Pei等（2003ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences100,7803-7807。这种保护作用可以经由响应于应激而活化的Ca2+-依赖性存活级联间接介导（Li等（2006JournaloftheAmericanSocietyofNephrology17，1848-1857。膜电位振荡可以直接控制细胞周期进程。K+通道已经被证明在多种细胞类型中具有细胞周期时相依赖性表达、定位和活性（HuangJan2014TheJournalofCellBiology206,151-162。许多报道表明，伴随膜超极化的增加的K+发生在^进程时，并且它是S期起始所必需的。去极化可以防止多种细胞系中的S转换，所述多种细胞系包括鼠神经母细胞瘤细胞和MCF-7人类乳腺癌细胞（HuangJan2014TheJournalofCellBiology206，151-162;Yang，Brackenbury2013FrontiersinPhysiology4,185;Boonstra等（1981JournalofCellularPhysiology107,75-831981;Wonderlin等（1995JournalofCellularPhysiology165,177-185。在该研究中，发现了细胞周期时相和KCNK9表达之间的相关。KCNK9表达与S+G2M期不相称地相关和KCNK9开放导致超极化的事实表明，KCNK9的增加的表达活性促进细胞周期进程。这将支持通过mAb靶向KCNK9在体内降低增殖指数并减少肿瘤负荷的发现。[0278]存在离子通道靶向抗体藉以扰乱通道功能的多种机制。通过合理设计产生的大多数抗体通过阻塞离子渗透途径或通过改变经由多种刺激进行通道门控所必需的模态modalities来起作用（SunLi2013ActaPharmacolSin34,199_204;Lee等（2014Cell157,1393-1404。本文描述的抗体诱导通道内化。在副肿瘤性通道病变诸如获得性神经性肌强直的研究中已经报道了自身反应性抗体的这种作用模式（SunLi2013ActaPharmacolSin34,199-204。肿瘤抗原被认为触发肿瘤细胞表面蛋白（包括电压门控K+通道）的自身反应性抗体的产生。这些自身反应性抗体诱导通道内化并导致神经肌肉传递缺陷（Shillito等（1995AnnalsofNeurology38,714_722;Tomimitsu等（2004AnnalsofNeurology56，440-444。与阻断抗体相比，通过诱导内化起作用的抗体的优势在于，有效的抑制取决于细胞表面上表达的抗原的量和密度。这提供了基于机制的特异性，使得仅具有足够高的通道表达的肿瘤细胞被抗体靶向。此外，选择有效胞吞的抗体用于开发抗体-药物缀合物，其中抗体促进细胞毒性有效载荷payload的肿瘤特异性递送以杀死肿瘤细胞。因此，Y4的机制与细胞毒性缀合物的组合使其成为有利的治疗策略，通过增强的特异性和或功效而具有期望的治疗指数。[0279]本发明公开的主题公开了，离子通道可被抗体靶向，并且该方法具有治疗前景。本文描述的用于开发和表征抗体的策略可以应用于其他离子通道，提供对这类研究不足under-studied的通道蛋白的生理学和病理学意义的理解。[0280]参考文献[0281]在说明书中提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献指示本发明公开的主题所属领域的技术人员的水平。所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献在此通过引用并入，其程度如同每个单独出版物、专利申请、专利和其他参考文献被具体和单独指明通过引用并入的相同程度。将理解，尽管一些专利申请、专利和其他参考文献在本文中被提及，这样的参考文献并不构成对任何这些文件形成本领域公知常识的部分的承认。如果说明书和任何并入的参考文献之间存在冲突，则以说明书包括其可能基于并入的参考文献的任何修改为准。除非另有指示，否则本文使用术语的标准的领域公认的含义。本文使用多种术语的标准缩写。[0282]尽管为了清楚理解的目的通过说明和示例的方式相当详细地描述了前述主题，但本领域技术人员将理解，可以在所附权利要求的范围内实践某些改变和修改。

权利要求：1.一种分离的抗体、抗体片段或其衍生物，所述分离的抗体、抗体片段或其衍生物与KCNK9钾通道的细胞外结构域的至少一个表位特异性结合。2.根据权利要求1所述的抗体、片段或衍生物，其中所述抗体、其片段或衍生物不与其他钾通道结合。3.根据权利要求1或2所述的抗体、片段或衍生物，其中所述至少一个表位包含MlPl结构域。4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体、片段或衍生物，其中所述至少一个表位包含SEQIDNO:1的氨基酸Glu3Q和Ile88之间的表位。5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体、抗体片段或衍生物，其中所述抗体、片段或衍生物抑制KCNK9活性。6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体、片段或衍生物，其中所述抗体、片段或衍生物与细胞的表面上的至少一个表位的结合引起所述细胞的表面上的钾通道的内化和胞吞。7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体、片段或衍生物，其中所述抗体、片段或衍生物与表达KCNK9的细胞的表面上的至少一个表位的结合抑制所述表达KCNK9的细胞的存活。8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体、片段或衍生物，其中所述表达KCNK9的细胞包括癌细胞。9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体、片段或衍生物，其中所述KCNK9钾通道包括人类KCNK9。10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体、片段或衍生物，其中所述抗体为单克隆抗体。11.根据权利要求1至10中任一项所述的抗体、片段或衍生物，其中所述抗体为人源化抗体。12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体、片段或衍生物，其中所述抗体为Y4。13.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体、片段或衍生物，其中所述抗体、片段或衍生物与至少一种剂缀合。14.根据权利要求13所述的抗体、片段或衍生物，其中所述至少一种剂选自由以下组成的组:治疗剂和标记剂。15.根据权利要求13或14所述的抗体、片段或衍生物，其中所述至少一种剂为抗赘生物剂。16.根据权利要求13至15中任一项所述的抗体、片段或衍生物，其中所述抗体、片段或衍生物经由接头与所述至少一种剂缀合。17.根据权利要求16所述的抗体、片段或衍生物，其中所述接头选自由以下组成的组：可裂解接头和不可裂解接头。18.根据权利要求16或17所述的抗体、片段或衍生物，其中所述可裂解接头为肽接头，且所述不可裂解接头为硫醚接头。19.根据权利要求18所述的抗体、片段或衍生物，其中所述肽接头包括缬氨酸-瓜氨酸肽接头。20.—种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至19中任一项所述的抗体、片段或衍生物。21.根据权利要求20所述的药物组合物，所述药物组合物还包含至少一种抗赘生物剂。22.—种诊断组合物，所述诊断组合物包含根据权利要求1至19中任一项所述的抗体、片段或衍生物。23.—种试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求1至17中任一项所述的抗体、片段或衍生物。24.—种评价表达KCNK9的细胞的存在的方法，所述方法包括使疑似在其表面上表达KCNK9的细胞或组织与根据权利要求1至19中任一项所述的抗体、片段或衍生物或者与根据权利要求22所述的诊断组合物接触。25.—种抑制KCNK9活性的方法，所述方法包括使在其表面上表达KCNK9的细胞或组织与根据权利要求1至19中任一项所述的抗体、片段或衍生物或者与根据权利要求20或21所述的药物组合物接触。26.—种抑制表达KCNK9的癌细胞的生长或存活的方法，所述方法包括使在其表面上表达KCNK9的癌细胞与根据权利要求1至19中任一项所述的抗体、片段或衍生物或者与根据权利要求20或21所述的药物组合物接触。27.根据权利要求24至26中任一项所述的方法，其中所述接触在体外在细胞或组织中进行。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述细胞或组织包括人类细胞或组织。29.根据权利要求24至26中任一项所述的方法，其中所述接触在受试者体内进行。30.根据权利要求29所述的方法，其中所述受试者为人类。31.—种抑制患有或疑似患有癌症的受试者中的肿瘤的生长和或转移的方法，所述方法包括将根据权利要求1至19中任一项所述的抗体、片段或衍生物或者根据权利要求20或21所述的药物组合物以有效抑制所述受试者中的肿瘤的生长和或转移的量施用至所述受试者。32.—种刺激患有或疑似患有癌症的受试者中的补体依赖性癌细胞的细胞毒性的方法，所述方法包括将根据权利要求1至19中任一项所述的抗体、片段或衍生物或者根据权利要求20或21所述的药物组合物以有效刺激所述受试者中的补体依赖性癌细胞的细胞毒性的量施用至所述受试者。33.—种用于治疗有相应需要的受试者中表达KCNK9的癌症的方法，所述方法包括将根据权利要求1至19中任一项所述的抗体、片段或衍生物或者根据权利要求20或21所述的药物组合物以有效治疗所述受试者中所述表达KCNK9的癌症的量施用至所述受试者。34.根据权利要求31至33中任一项所述的方法，所述方法还包括将有效量的常规癌症治疗施用至所述受试者。35.根据权利要求34所述的方法，其中所述常规癌症治疗选自由以下组成的组:化学疗法、放射疗法、免疫疗法、质子疗法、光动力疗法和手术。36.根据权利要求31至35中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组:乳腺癌和肺癌。37.根据权利要求36所述的方法，其中所述肺癌包括非小细胞肺癌。38.根据权利要求36所述的方法，其中所述肺癌包括小细胞肺癌。

百度查询： 约翰霍普金斯大学 马里兰大学巴尔的摩分校 靶向钾通道KCNK9的新的单克隆抗体抑制剂