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申请/专利权人：斯堪的纳维亚科技集团公司

申请日：2015-04-23

公开（公告）日：2016-12-14

公开（公告）号：CN106232811A

专利技术分类：..真菌[2006.01]

专利摘要：本发明涉及制备具有发酵木糖的能力的糖发酵酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae菌株的方法，其中所述方法包括不同的程序步骤。该方法包括使第一形成孢子的酿酒酵母菌株与第二酿酒酵母单倍体菌株接合。其后，进行筛选接合的细胞，生长此类接合的细胞，和通过显微镜检查验证展现基本的形态学的接合的细胞。其后，进行产生接合的细胞的混合物，使混合物经受连续恒化器木质纤维素培养和进行获得具有发酵木糖的能力的糖发酵酿酒酵母细胞。本发明还包括通过所述方法获得的菌株。

专利权项：一种酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae菌株，所述菌株包含在其基因组中的编码木酮糖激酶的至少一个天然XKS1基因、在其基因组中的编码木糖醇脱氢酶的至少一个天然XDH1基因、和在其基因组中的至少一个modGre3基因，所述modGre3基因编码具有木糖还原酶活性的SEQ ID NO 1的氨基酸序列或编码具有木糖还原酶活性的所述氨基酸序列的片段，其中所述菌株通过以下步骤可获得：a使第一酿酒酵母菌株形成孢子用于提供所述菌株的至少20个四分体，b将从Scheffersomyces stipitis获得的编码木糖还原酶和木糖醇脱氢酶的DNA和从酿酒酵母获得的编码木酮糖激酶的DNA引入第二酿酒酵母菌株，c通过以下使第一形成孢子的酿酒酵母菌株与针对木糖演化的和处于单倍体状态的第二酿酒酵母菌株接合以提供接合的细胞：在YPD琼脂平板上将所述酿酒酵母单倍体菌株的细胞与在步骤a中获得的每个四分体混合，d在木糖和遗传霉素琼脂平板上筛选接合的细胞，e在最小限定木糖液体培养基中生长来自步骤d的接合的细胞，f通过显微镜检查证实接合的细胞表现出出芽酵母的基本形态学特征，并选择具有基本形态学特征的此类接合的细胞，g以等量从步骤f产生具有基本形态学特征的接合的细胞的混合物，h使混合物经受连续恒化器培养，所述连续恒化器培养最初在微需氧环境中和随后在厌氧环境中，所述连续恒化器培养使用以下供料策略：在数小时的循环时间范围中以供料和中断供料的循环以至少0.08h‑1为限定木糖培养基供料，且随后以至少0.13h‑1为恒定供料，i在厌氧环境中使混合物经受连续恒化器培养，所述连续恒化器培养用来自步骤h的细胞，使用木质纤维素，在数小时的循环时间范围中以供料和中断供料的循环以至少0.08h‑1为木糖培养基供料，且以至少0.13h‑1为恒定供料速率供料，j通过从恒化器反应器收集具有发酵木糖的能力的糖发酵酿酒酵母细胞，获得所述细胞，k将来自恒化器的细胞稀释到水中，然后将细胞平铺在YPD琼脂平板上以获得单菌落，并在30℃孵育持续至少4天。

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