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申请/专利权人：贝斯4创新公司

申请日：2015-02-13

公开（公告）日：2016-11-16

公开（公告）号：CN106133150A

专利技术分类：.包括核酸 [3,2006.01,2018.01]

专利摘要：确定给定的单一核苷酸是被甲基化的还是未被甲基化的方法，其特征在于下述步骤：a使所述单一核苷酸与一种或多种杂交探针类型接触，每种所述杂交探针类型在其未使用形式包含：1连接一个或多个处于基本不可检测状态的第一可检测元件的第一寡核苷酸，并且所述第一寡核苷酸还包含：i双链和单链区，和ii连接在所述双链区邻近所述单链区的末端的耐受核酸外切降解的区域，和2连接一个或多个也处在基本不可检测状态的第二可检测元件的第二单链寡核苷酸，并且改变所述第二单链寡核苷酸为至少部分是所述第一寡核苷酸的单链区的核苷酸序列互补物；b对于引起i所述单一核苷酸与所述耐受核酸外切降解的区域和所述单链区结合，和ii所述第二寡核苷酸与所述单一核苷酸和所述单链核苷酸区结合，以产生基本上双链的使用的探针的相关的探针类型；c1将所述使用的探针用甲基化依赖性限制性内切核酸酶在如果所述单一核苷酸被甲基化，则所述使用的探针在邻近耐受核酸外切降解的区域处被切割成两个双链寡核苷酸产物的条件下处理，或者c2将所述使用的探针用甲基化敏感性限制性内切核酸酶在如果所述单一核苷酸未被甲基化，则所述使用的探针在邻近耐受核酸外切降解的区域处被切割成两个双链寡核苷酸产物的条件下处理；并且，然后d1将步骤c1的产物用外切核酸酶或展现出外切核酸酶活性的聚合酶处理，使得如果所述单一核苷酸被甲基化，则仅释放处于可检测状态的第一可检测元件或释放处于可检测状态的第一和第二可检测元件二者，或如果所述单一核苷酸未被甲基化，则仅释放第二可检测元件，或者，d2将步骤c2的产物用外切核酸酶或展现出外切核酸酶活性的聚合酶处理，使得如果所述单一核苷酸未被甲基化，则仅释放处于可检测状态的第一可检测元件或释放处于可检测状态的第一和第二可检测元件二者，或如果所述单一核苷酸被甲基化，则仅释放第二可检测元件。

专利权项：一种确定给定的单一核苷酸是被甲基化的还是未被甲基化的方法，所述方法特征在于下述步骤：a使所述单一核苷酸与一种或多种杂交探针类型接触，每种所述杂交探针类型在其未使用形式包含：1连接一个或多个处于基本不可检测状态的第一可检测元件的第一寡核苷酸，并且所述第一寡核苷酸还包含：i双链和单链区，和ii连接在所述双链区邻近所述单链区的末端的耐受核酸外切降解的区域，和2连接一个或多个也处在基本不可检测状态的第二可检测元件的第二单链寡核苷酸，并且改变所述第二单链寡核苷酸为至少部分是所述第一寡核苷酸的单链区的核苷酸序列互补物；b对于引起i所述单一核苷酸与所述耐受核酸外切降解的区域和所述单链区结合，和ii所述第二寡核苷酸与所述单一核苷酸和所述单链核苷酸区结合，以产生基本上双链的使用的探针的相关的探针类型；c1将所述使用的探针用甲基化依赖性限制性内切核酸酶在如果所述单一核苷酸被甲基化，则所述使用的探针在邻近耐受核酸外切降解的区域处被切割成两个双链寡核苷酸产物的条件下处理，或者c2将所述使用的探针用甲基化敏感性限制性内切核酸酶在如果所述单一核苷酸未被甲基化，则所述使用的探针在邻近耐受核酸外切降解的区域处被切割成两个双链寡核苷酸产物的条件下处理；并且，然后d1将步骤c1的产物用外切核酸酶或展现出外切核酸酶活性的聚合酶处理，使得如果所述单一核苷酸被甲基化，则仅释放处于可检测状态的第一可检测元件或释放处于可检测状态的第一和第二可检测元件二者，或如果所述单一核苷酸未被甲基化，则仅释放第二可检测元件，或者，d2将步骤c2的产物用外切核酸酶或展现出外切核酸酶活性的聚合酶处理，使得如果所述单一核苷酸未被甲基化，则仅释放处于可检测状态的第一可检测元件或释放处于可检测状态的第一和第二可检测元件二者，或如果所述单一核苷酸被甲基化，则仅释放第二可检测元件。

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