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申请/专利权人：山西大学;长治医学院
摘要：本发明公开了一种利用CRISPRCas9技术构建斑马鱼asap1b基因敲除突变体的方法。具体包括以下步骤：确定asap1b基因敲除的靶点位置即asap1b‑gRNA‑Cas9靶位点，体外转录获得asap1b‑gRNA，将asap1b‑gRNA与Cas9mRNA导入斑马鱼受精卵中，筛选培养获得稳定遗传的asap1b基因敲除突变体。本发明根据选择的一段位于asap1b基因第1个外显子的高效率打靶序列，利用CRISPRCas9技术敲除斑马鱼中的asap1b基因并产生可稳定遗传的asap1b基因敲除斑马鱼，且本发明共获得了3种突变类型的asap1b基因敲除斑马鱼品系，均对Asap1b蛋白翻译造成了提前终止，对研究asap1b基因的功能奠定动物模型基础。
主权项：1.一种利用CRISPRCas9技术构建斑马鱼asap1b基因敲除突变体的方法，其特征在于：包括如下步骤：S1.设计斑马鱼asap1b基因的gRNA-Cas9打靶位点，并确认asap1b-gRNA-Cas9靶位点敲除特异性；S2.制备asap1b-gRNA；S3.将asap1b-gRNA和Cas9mRNA共同导入斑马鱼胚胎中制备F0代斑马鱼，并鉴定asap1b-gRNA-Cas9靶位点序列突变效率；S4.检测嵌合型F0代斑马鱼子代遗传基因类型，筛选出可以生殖遗传敲除asap1b的F0代亲本；S5.筛选F1代斑马鱼中asap1b基因敲除杂合突变体，确认asap1b杂合敲除突变类型；S6.筛选F2代斑马鱼中asap1b基因敲除纯合突变体，确认asap1b纯合敲除突变类型，培养获得稳定遗传的斑马鱼asap1b基因敲除突变体，即完成利用CRISPRCas9技术对斑马鱼asap1b基因敲除突变体的构建。
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权利要求：
百度查询： 山西大学 长治医学院 一种利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼asap1b基因敲除突变体的方法
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