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申请/专利权人：陕西省微生物研究所

摘要：本发明涉及一种埃吉类芽孢杆菌（Paenibacilluselgii）SWL‑W8，保藏编号为CCTCCNO.M2017113，保藏日期为2017年3月，保藏在中国典型培养物保藏中心。该菌剂可应用于植物病原真菌和细菌的拮抗，尤其适用于魔芋软腐病等植物病原细菌引起土传病害防治；其无污染、无有害残留，生产工艺简单、成本低廉，易于推广。

主权项：1.一种埃吉类芽孢杆菌（Paenibacilluselgii）SWL-W8，保藏编号为CCTCCNO.M2017113，保藏日期为2017年3月，保藏在中国典型培养物保藏中心。

全文数据：_种埃吉类芽抱杆菌PaenibaciIIuseIgiiSWL-W8及其应用技术领域[0001]本发明属于微生物领域，涉及一种埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8及其应用。背景技术[0002]魔芋又称鬼芋、筠翦等，属被子植物门、单叶植物纲、天南星科魔芋属，多年生草本块茎植物，具有重要的药用、保健功能及观赏价值。魔芋块茎富含葡甘聚糖KGM，可广泛用于食品、医疗、化工、造纸、纺织、石油等行业，被称为“东方魔粉”。我国是魔芋生产大国，占世界总产量60%，魔芋精粉年产量约为1.5万吨。但是，魔芋软腐病的危害严重影响了魔芋产业的发展，特别是随着连作和种植面积的扩大，软腐病的发病率越来越高，每年基本达到20-30%，高温多雨季节更高达50%左右。该病害造成的损失一般在30%左右，严重者可达80%甚至绝收，被称为魔芋的“癌症”。目前尚未针对软腐病的抗病品种，也没有特效药剂，严重制约着魔芋产业发展。魔芋软腐病的防治主要依赖普通药剂，如农用链霉素，多效霉素，宁南霉素、多菌灵、腐烂灵、芋腐灵、硫酸铜等进行防治，但防治效果不理想，急需寻找有效防治方法。农药的过度使用和不当滥用也容易引起软腐病病菌的抗性，同时造成环境污染、生态破坏、食品污染等严重问题。因此，利用无公害防治技术防治软腐病，减少农药使用量和减轻农药污染，已成为魔芋产业可持续发展的当务之急。[0003]利用生物防治技术手段进行植物病害防治，具有安全、高效、无污染等特点，符合绿色植保理念，与生态环境可持续发展吻合，是未来农药发展的必然趋势。发明内容[0004]本发明的提供一种埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8及其应用，该菌株能够对多种植物病原真菌和细菌起到很好的拮抗作用，特别是对魔芋软腐病病原菌具有很好的抑制作用，防治魔芋软腐病的效果与化学防治效果无明显差别，并具有促生作用。该菌绿色无污染，是环境友好的新型农药制剂，解决现有技术中存在的问题。[0005]为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：[0006]—种埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8,保藏编号为CCTCCΝ0.Μ2017113，保藏在中国典型培养物保藏中心，该菌株能够对多种植物病原真菌和细菌起到拮抗作用。[0007]进一步的，所述埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂的制备方法，包括以下步骤：[0008]菌种活化:将4°C保藏的埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌株接种至LB固体培养基上，30〜37°C培养24〜48小时，然后挑取单菌落接种于LB斜面培养基上，30〜37°C恒温培养24〜48小时；[0009]种子液的制备:将上述活化好的菌种接种至LB液体培养基中，30〜37°C下摇床培养24〜48小时，得到种子液；[0010]发酵培养:将种子液接入发酵培养基中，接种量为8%，30〜37°C，摇床转速为150〜230rpm的条件下培养48〜72小时，得到菌液孢子数为109cfumL的液体制剂;发酵培养基的组分为:葡萄糖30g、酵母浸粉9g、鱼粉10g、磷酸氢二钾1.5g、磷酸二氢钾lg、七水硫酸镁0.6g、水1000mL，pH6。[0011]固体菌剂制备:将发酵液与载体混匀后制成微生物菌剂。[0012]进一步的，所述载体是麸皮、稻糠的一种或几种。[0013]进一步的，所述埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂的使用方法如下，将埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂按1:20〜1:100的体积比例用水稀释，将稀释后的液体菌剂进行灌根、叶面、花蕾和果实表面喷施或全株喷施，或同时喷洒于植物栽培的土壤。[0014]本发明的有益效果是[0015]本发明埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8能有效抑制多种病原细菌和病原真菌，从而防止植物病害的发生，其主要抑菌成份为抗菌蛋白。尤其适用于魔芋软腐病等植物病原细菌引起土传病害防治。其有益效果在于:抑菌谱广，对多种植物常见细菌病害和真菌病害都有很好的抑菌效果;具有明显的促生作用，对植株生长、提高植物抗逆性具有促进作用;对高温、酸碱和紫外辐射的耐受力较强，具有很强的抗逆性;无污染、无有害残留，是环境友好型生物农药;本发明生产工艺简单、成本低廉，易于推广。附图说明[0016]图1是埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌落形态图；[0017]图2是埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8扫描电镜观察图；[0018]图3是埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8的BIOLOG鉴定图；[0019]图4是埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8对魔芋软腐病病原菌的拮抗作用图；[0020]图5是埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8对水稻恶苗病菌的拮抗作用图；[0021]图6是埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8对番茄早疫病菌的拮抗作用图；[0022]图7是埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8抗菌蛋白DEAE离子层析图左）和SephadexG-75层析图（右）；[0023]图8是埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8抗菌蛋白电泳图谱；[0024]图9是埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8抗菌蛋白LS51对甘蓝黑腐病菌的抑制活性图；[0025]图10是不同温度处理后埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8抗菌蛋白LS51对魔芋软腐病菌的抑制活性图；[0026]图11是埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8对魔芋软腐病的盆栽和大田预防试验图；[0027]图12是埃吉类芽孢杆菌（PaenibacilluselgiiSWL-W8对魔芋块茎的促生长作用。具体实施方式[0028]下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。[0029]埃吉类芽孢杆菌SWL-W8由陕西省微生物研究所在云南腾冲温泉分离得到。对该菌进行了形态、BIOLOG及16SrDNA鉴定，确定为埃吉类芽孢杆菌Paenibacilluselgii。菌落凸起，乳白色，表面光滑，湿润。革兰氏阳性菌，菌株形态为长杆状，大小约为0.2〜0.5X3〜ΙΟμπι，参见图2。[0030]在抗菌谱方面，本发明的菌株埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL_W8对魔芋软腐病菌（Pectobacteriumcarotovorum、烟草青枯病菌（Ralstoniasolanacearum、甘蓝黑腐病菌（Xanthomonascampestris、水稻恶苗病菌FusariummoniliformeSheld.、棉立枯病菌RhizoctoniasolaniKChn、苹果青霉病菌Penicilliumsp.、烟草赤星病菌Alternariaalternata、番前早疫病菌Alternariasolani等植物病原菌都有抑制作用。[0031]在抗菌机制方面，本发明的埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8通过产生抗菌蛋白抑制植物病原菌的生长。[0032]在诱导抗性方面，本发明的埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8可通过诱导植物蛋白组和抗病相关基因表达水平的变化等，从而提高抗病性能，达到减少病害发生的目的。[0033]在促进植物生长方面，本发明的埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8对魔芋等作物具有很好的促生作用，施用该菌剂后，作物农艺性状均优于对照组。[0034]在抗逆性方面，本发明的埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8具有对紫外线不敏感，耐高温，耐储存等特点，易于在田间推广使用。[0035]在田间防效方面，埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂对魔芋软腐病具有很好的防治作用。[0036]从埃吉类芽孢杆菌SWL-W8中提取出主要抑菌成分为抗菌蛋白。发酵液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE离子层析柱、SephadexG-75葡聚糖凝胶层析获得约25KD抗菌蛋白。对抗菌蛋白进行生物学特性研究，该蛋白对酸稳定，碱度变大，抑菌活性减低;40°C-80°C处理30min，抑菌活性不变，100°C处理30min抑菌活性下降至74.5%。紫外照射2-24h，蛋白抑菌活性不变。对蛋白酶K和胰蛋白酶不敏感。[0037]埃吉类芽孢杆菌SWL-W8菌剂制备方法步骤为菌种活化、种子液的制备、发酵培养，获得菌液孢子数为IO9CfuAnL的液体制剂;发酵培养基的组分为:葡萄糖30g、酵母浸粉9g、鱼粉l〇g、磷酸氢二钾1.5g、磷酸二氢钾lg、七水硫酸镁0.6g、水1000mL，pH6。[0038]埃吉类芽孢杆菌SWL-W8菌剂对魔芋软腐病的预防效果为78.30%，对魔芋软腐病的治疗作用为74.44%，与常用药剂农用链霉素的防治效果相当，可作为替代药剂使用。同时，施用埃吉类芽孢杆菌SWL-W8菌剂后，魔芋全株高，块茎膨大系数等农艺性状均比清水和药剂对照组有所提高，对植物促生长效果明显。[0039]—、埃吉类芽抱杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8的分离[0040]埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8由陕西省微生物研究所在云南腾冲温泉分离得到。从温泉中收集水样，对水样进行梯度稀释，分别将102、103、104倍稀释液IOOyL，涂布于LB培养基中，32°C恒温培养2天，挑取单菌落继续在LB培养基中划线纯化。将纯化菌种以魔芋软腐病菌为靶标菌进行拮抗菌的筛选。结果筛选出一株对靶标菌有很好拮抗作用的菌株，命名为SWL-W8。[0041]二、埃吉类芽孢杆菌（PaenibacilluselgiiSWL-W8的形态、BIOLOG及16SrDNA鉴定[0042]1形态观察[0043]SWL-W8菌株在LB平板上培养，观察菌落形态，并参照周德庆《微生物实验教程》进行革兰氏染色、芽孢染色等。菌落形态如图1所示。菌落凸起，乳白色，表面光滑，湿润。革兰氏阳性菌，菌株形态为长杆状，大小约为〇.2〜0.5X3〜ΙΟμπι。[0044]⑵BIOLOG鉴定[0045]参见图3,对菌株SWL-W8进行BIOLOGGenm分析，将菌株接种到LB培养基上，24h后用棉签将菌落沾起，分散到IF-A专用接种液中，制备成均一的菌悬液，调整浊度到52%土2%，接种到GenIII鉴定板上，接种量150yL，30°C培养24h，在Biolog微生物自动分析仪上读取数据。[0046]表1不同碳源生化反应测试结果[0051]注:+表示阳性反应，-表示阴性反应，b表示边界值阳性反应不明显）[0052]316SrDNA鉴定[0053]提取SWL-W8菌株DNA，以该DNA为模板，采用16SrDNA通用引物（7F:5’_CAGAGTTTGATCCTGGCT-3’和1540R:5’-AGGAGGTGATCCAGCCGCA-3’）进行PCR扩增，PCR产物进行测序，序列大小16SrDNA为1385bp，通过核糖体数据库http:rdp·cme·msu·eduindex,jsp上比对，显示菌株SWL-W8为埃吉类芽孢杆菌Paenibacilluselgii。与埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiTBT3-4基因序列同源性达100%，最终确定菌株SWL-W8为埃吉类芽抱杆菌Paenibacilluselgii。[0054]埃吉类芽抱杆菌Paenibacilluselgii16SrDNA序列如下：[0055]GACCCTTTCGGGGTTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTAGGCAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTACCGGAAACGGTAGCTAAGACCGGATAAGTGATTCTCTTGCATGAGAGGATCAAGAAACACGGGGCAACCTGTGGCTTACAGATGGGCCTGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGGGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGCAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGCCAGGGAAGAACGTCGTGGAGAGTAACTGCTCTGCGAATGACGGTACCTGAGAAGAAAGCCCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGCCGCTTAAGTCTGGTGTTTAAGCCCGAGGCTCAACCTCGGTTCGCACTGGAAACTGGGTGGCTTGAGTGCAGGAGAGGAAAGCGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTTCTGGCCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTAGGGGTTTCGATACCCTTGGTGCCGAAGTAAACACAATAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGCTCGCAAGAGTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCAGTGGAGTATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCTCTGAATATCCTAGAGATAGGGTAGGCCTTCGGGACAGAGGAGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGAACTTAGTTGCCAGCATTGAGTTGGGCACTCTAAGTTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTACTACAATGGCCGGTACAACGGGAAGCGAAGTCGCGAGATGGAGCCAATCCTAAGAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGTCGGAATTGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTACAACACCCGAAGTCGGTGGGGTAAACCGCAAGGAGC[0056]本发明提供的埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为武汉市武昌珞珈山武汉大学，邮编:430072;本发明菌株的信息为:埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8,保藏号为CCTCCNO.M2017113,保藏日期为2017年3月。[0057]三、供试菌拮抗植物病原菌性能测试[0058]参见图4-图6，植物病原细菌采用倒平板法。将植物病原细菌在LB液体培养基中培养24h，吸取ImL菌液加入到融化并冷却至50°C的LB固体培养基中，混匀后倒平板，冷却凝固后在平板的四个角上点接埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8,32°C培养2d后测量抑菌圈大小。LB培养基:胰蛋白胨20g，酵母浸粉，氯化钠，琼脂15-20液体不加琼脂），自来水比印!17.〇-7.2，121°：灭菌2〇11^11。[0059]植物病原真菌采用平皿对峙培养法。将植物病原真菌接种在PDA培养基中，28°C培养5d，用直径9_的打饼器将病原真菌打成菌饼，在每个PDA培养基中央放置一个菌饼，距离菌饼圆心直线距离2cm位置的四个角上接种埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8。同时设对照培养。28°C培养5d后测量病原真菌菌落直径，计算抑制率。[0060]抑制率=对照病原真菌菌落直径-实验病原真菌菌落直径对照病原真菌菌落直径X100%。[0061]PDA培养基：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15〜20g，水IOOOmL，pH值自然。[0062]结果显示，埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8对多种病原真菌和病原细菌均有较强的抑制作用。[0063]表2埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8对不同病原菌的抑制作用[0064][0065]四、埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8抗菌蛋白的纯化及对病原菌的抑制性能检测[0066]埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8接种于LB斜面，培养24小时，刮取少量菌体接种在LB液体培养基中，30°C，140rmin培养4811。4°：，4000rmin离心收集上清液，在发酵上清液中加入一定浓度的硫酸铵范围50%-80%，沉淀，4°C，8000rmin离心收集蛋白沉淀，用pH7.4Tris-HCl缓冲液溶解。蛋白溶液用透析袋去除小分子盐等杂质，即得抗菌粗蛋白溶液。粗蛋白经DEAE高流速琼脂糖微球离子层析，分别用0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7moILNaCl溶液各IOOmL洗脱，收集各洗脱峰，进行抑菌活性检测，其中第5个洗脱峰具有抑菌活性。对该洗脱峰进一步用SephadexG-75葡聚糖凝胶层析，获得单一蛋白洗脱峰，即为本发明抗菌蛋白LS51。各层析图谱见图7。蛋白电泳显示抗菌蛋白LS51分子量约为25KD，电泳图见图8。[0067]对抗菌蛋白LS51进行生物学特性研究，该蛋白对酸稳定，碱度变大，抑菌活性减低;40°〇80°：处理301^11，抑菌活性不变，100°：处理301^11抑菌活性下降至74.5%;紫外照射2-24h，蛋白抑菌活性不变;该蛋白对蛋白酶K和胰蛋白酶不敏感。[0068]抑菌活性检测方法:病原细菌用LB液体培养24h，吸取ImL菌液至IOOmL融化后冷却至50°C的LB固体培养基中，倒平板，待平板凝固后，用7mm打孔器打孔，每孔加入蛋白溶液IOOyL，并用缓冲液做对照。32°C培养24h，观察抑菌效果。[0069]结果见图9、图10，埃吉类芽孢杆菌PaenibaciIIuselgiiSWL-W8抗菌蛋白LS51对病原菌有很好的抑制作用。可见抗菌蛋白LS51是埃吉类芽孢杆菌（PaenibacilluselgiiSWL-W8的主要抑菌成分之一。[0070]五、埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂的制备[0071]菌种活化:将4°C保藏的SWL-W8菌株接种至LB固体培养基上，30〜37°C培养24〜48小时，然后挑取单菌落接种于LB斜面培养基上，30〜37°C恒温培养24〜48小时；[0072]种子液的制备:将上述活化好的菌种接种至LB液体培养基中，30〜37°C下摇床培养24〜48小时，得到种子液；[0073]发酵培养:将种子液接入发酵培养基中，接种量为8%，30〜37°C，摇床转速为150〜230rpm的条件下培养48〜72小时，得到菌液孢子数为109cfumL的液体制剂;发酵培养基的组分为:葡萄糖30g、酵母浸粉9g、鱼粉10g、磷酸氢二钾1.5g、磷酸二氢钾lg、七水硫酸镁0.6g、水1000mL，pH6。[0074]固体菌剂制备：[0075]将发酵液与载体（可以是麸皮、稻糠等载体的一种或几种）混匀后制成微生物菌剂。[0076]微生物菌剂的使用方法，将微生物菌剂按1:20〜1:100的体积比例用水稀释，将稀释后的液体菌剂进行灌根、叶面、花蕾和果实表面喷施或全株喷施，或同时喷洒于植物栽培的土壤。[0077]六、埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂在防治魔芋软腐病病害的应用[0078]试验时间：2016年6-7月在安康市农科所温室进行。[0079]试验品种:花魔芋[0080]供试病原菌菌株:魔芋软腐病病原菌陕西省微生物研究所分离并保藏）[0081]试验设计3个处理:①埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌液孢子数109cfumL，②市售72%农用链霉素，③清水。[0082]预防作用的测定:选取健康、长势均匀的魔芋盆栽苗，分别灌根3个处理的药液，每棵灌根500mL。24h后接种魔芋软腐病病原菌，采用灌根方法接种，将魔芋软腐病病原菌菌液配成105cfumL菌液，每棵接种IOOmL菌液。每个处理3次重复，每重复10棵苗，5d后按分级标准进行病情调查。[0083]治疗作用的测定:选取健康、长势均匀的魔芋盆栽苗，接种魔芋软腐病病原菌，采用灌根方法接种，将魔芋软腐病病原菌菌液配成IO5CfVmL菌液，每棵接种IOOmL菌液。24h后分别灌根3个处理的药液，每棵灌根500mL。每个处理3次重复，每重复10棵苗，5d后按分级标准进行病情调查。[0084]表3病情严重度分级标准[0085][0086]~病情指数=Σ各级病株数X该病级值八调查总株数X最高级值）X100,相对防治效果（％=对照病情指数一处理病情指数对照病情指数X100,计算结果用SPSS软件进行方差分析，清水对照防效记为0，统计结果如下。[0087]表4埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂对魔芋软腐病的预防作用[0088][0089]表5埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂对魔芋软腐病的治疗作用[0090][0091]由结果可见，埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂对魔芋软腐病的预防效果达78.30%，对魔芋软腐病的治疗作用达74.44%，与常用药剂农用链霉素的防治效果相当，可作为替代药剂使用。[0092]七、埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂防治魔芋软腐病的大田试验，参见图11。[0093]试验时间：2017年3-11月在汉中市农科所魔芋种植基地进行。[0094]试验品种:花魔芋[0095]供试病原菌菌株:魔芋软腐病病原菌陕西省微生物研究所分离并保藏）[0096]选取IOOg左右，大小均匀的魔芋种芋下种，种植时按照以下处理进行药剂防治。设计以下处理组:①实验组用埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂原液、10倍稀释液、100倍稀释液分别进行灌根处理，②对照组分别采用清水和72%农用链霉素进行灌根处理。每株灌根IOOmU每处理50株，重复3次，正常水肥管理。每月调查病情，记录软腐病发病率，收获期计算软腐病总发病率。8月测量魔芋株高，11月收获时对魔芋块茎进行称重，计算膨大系数。膨大系数=收获时魔芋块茎重量种芋重量。[0097]表6埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂对魔芋软腐病的大田防治效果[0098][0099]结果见表6,清水对照组软腐病发病率为37.81%，而不同浓度埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂灌根处理后，魔芋软腐病的发病率均有下降，其中施用菌剂原液的发病率最低，为12.58%，与72%农用链霉素效果相当。随着菌剂浓度降低，对魔芋软腐病的防效逐渐减弱。同时，施用埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂后，魔芋全株高，块茎膨大系数等农艺性状均比清水和药剂对照组有所提高。其中菌剂原液全株高37.72cm，块茎膨大系数8.64，清水对照全株高仅为32.87cm，块茎膨大系数6.12，可见埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂促生长效果明显，参见图12,上排为菌剂处理后收获的魔芋块茎，下排为对照处理收获的魔芋块茎。[0100]以上应用了具体个例对本发明进行阐述，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明。对于本发明所属技术领域的技术人员，依据本发明的思想，还可以做出若干简单推演、变形或替换。

权利要求：1.一种埃吉类芽孢杆菌（PaenibacilluselgiiSWL-W8,保藏编号为CCTCCNO.M2017113，保藏日期为2017年3月，保藏在中国典型培养物保藏中心。2.根据权利要求1所述埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8,其特征在于，所述埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂的制备方法，包括以下步骤：菌种活化:将4°C保藏的埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌株接种至LB固体培养基上，30〜37°C培养24〜48小时，然后挑取单菌落接种于LB斜面培养基上，30〜37°：恒温培养24〜48小时；种子液的制备:将上述活化好的菌种接种至LB液体培养基中，30〜37°C下摇床培养24〜48小时，得到种子液；发酵培养：将种子液接入发酵培养基中，接种量为8%，30〜37°C，摇床转速为150〜230rpm的条件下培养48〜72小时，得到菌液孢子数为109cfumL的液体制剂;发酵培养基的组分为：葡萄糖30g、酵母浸粉9g、鱼粉10g、磷酸氢二钾1.5g、磷酸二氢钾lg、七水硫酸镁0.6g、水1000mL，pH6。固体菌剂制备:将发酵液与载体混匀后制成微生物菌剂。3.根据权利要求2所述埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8,其特征在于，所述载体是麸皮、稻糠的一种或几种。4.根据权利要求1所述埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8,其特征在于，所述埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂的使用方法，将埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8菌剂按1:20〜1:100的体积比例用水稀释，将稀释后的液体菌剂进行灌根、叶面、花蕾和果实表面喷施或全株喷施，或同时喷洒于植物栽培的土壤。5.一种埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8的应用，其特征在于，该菌剂在植物病原真菌和细菌拮抗的应用。6.根据权利要求5所述的埃吉类芽孢杆菌PaenibacilluselgiiSWL-W8的应用，其特征在于，该菌剂在防治魔芋软腐病病害的应用。

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