买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：东北林业大学

摘要：本发明涉及矮牵牛‘梅林’高效的遗传转化体系建立。包括以下步骤：1叶片暗培养；2侵染液的制备；3侵染；4共培养；5筛选培养；6获得抗性植株；7获得阳性植株。本发明通过对叶片暗培养和菌液侵染时间、卡那霉素敏感性检测和抗生素浓度筛选等改进了矮牵牛‘梅林’的遗传转化率，解决了转化率和分化率低，育种时间长等问题，通过本体系抗性植株生根率达到66.24％，2.5个月即可获得阳性转基因植株。

主权项：1.一种农杆菌介导的矮牵牛‘梅林’高效遗传转化体系，包括以下步骤：1矮牵牛‘梅林’叶片暗培养，将叶片切成1.0cm2左右的叶盘放入培养基MS+2.0mg·L-16-BA+0.3mg·L-1NAA中暗培养2d；2侵染液的制备，将含有绿色荧光蛋白基因GFP的农杆菌菌液在YEP+50mgLKana+100mgLRif的固体培养基上划线，28℃暗培养48h后，挑取长势较好的单菌落，接种于10ml附加50mg·L-1Kana和100mg·L-1Rif的YEP液体培养基中，28℃，200rpm震荡培养24h后，从中吸取菌液按1:100的比例加入到50ml含有50mg·L-1Kana和100mg·L-1Rif的YEP液体培养基中，28℃，200rpm振荡培养至OD600＝0.5，将活化后的菌液4500rpm离心10min，弃去上清，用含有20mg·L-1AS的12MS不含NH4NO3液体培养基悬浮沉淀的菌体，200rpm震荡1.5-2h；3侵染，将1中的叶片在2中的侵染液中放置3min后取出，置于无菌的滤纸上吸干表面附着的菌液；4共培养，将3中的叶片接种在共培养基MS+2.0mg·L-16-BA+0.3mg·L-1NAA上，28℃黑暗培养36h；5筛选培养，将4中的叶片继代到筛选培养基MS+2.0mg·L-16-BA+0.3mg·L-1NAA+50mg·L-1Kana+500mgLCef上进行抗性愈伤组织或不定芽筛选，每隔2周继代一次；6获得抗性植株，将5中获得的绿色不定芽继代到添加25mg·L-1卡那霉素的生根培养基12MS+0.1mg·L-1NAA中诱导生根，生根的不定芽即为抗性植株；7获得阳性植株，将6中的植株经PCR和RT-PCR检测后条带正确即为阳性植株。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 东北林业大学 一种农杆菌介导的矮牵牛‘梅林’高效遗传转化体系