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申请/专利权人:山东第一医科大学附属省立医院(山东省立医院)
摘要:一种新型检测肿瘤组织中肿瘤抗原OVA12表达水平的方法,包括如下步骤:步骤一:收集不同类型及病理分期的肿瘤组织及相应癌旁组织标本,应用两株OVA12特异性单抗,采用免疫组化技术检测OVA12抗原表达水平,分析OVA12抗原在不同类型肿瘤组织、相应癌旁组织表达水平差异及其与肿瘤临床病理分期的相关性;步骤二:应用组织芯片技术对步骤一的肿瘤组织内OVA12表达水平进行再验证,建立临床肿瘤组织OVA12抗原标准化免疫组化检测方法。本发明通过建立新型标准化免疫组化检测技术,分析不同类型肿瘤病人OVA12抗原分布水平特征,及其与肿瘤分期的相关性,为临床肿瘤诊断提供新的高特异性和高敏感性检测指标。
主权项:1.一种新型检测肿瘤组织中肿瘤抗原OVA12表达水平的方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一:收集不同类型及病理分期的肿瘤组织及相应癌旁组织标本,应用两株OVA12特异性单抗,采用免疫组化技术检测OVA12抗原表达水平,分析OVA12抗原在不同类型肿瘤组织、相应癌旁组织表达水平差异及其与肿瘤临床病理分期的相关性;步骤二:应用组织芯片技术对步骤一的肿瘤组织内OVA12表达水平进行再验证,建立临床肿瘤组织OVA12抗原标准化免疫组化检测方法;免疫组化技术的具体步骤为:S1:组织切片;S2:烤片过夜;S3:脱蜡复水;S4:加热法100℃将切片置于柠檬酸缓冲液中进行抗原修复;S5:修复完成后用5%的山羊血清进行封闭;S6:加入80~120μl单抗B11F8和B10B9在4℃孵育过夜,同时用小鼠的正常IgG作为阴性对照;S7:孵育完毕后充分洗涤;S8:加入抗小鼠IgG的二抗室温孵育1h;S9:滴加DAB工作液显色,显色完全后用蒸馏水终止显色;S10:苏木素复染90s;S11:切片逐级脱水;S12:中性树胶封片,待树胶完全干燥后,在显微镜下观察并拍照,并进行组化结果评分。
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