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申请/专利权人：中山大学附属第三医院(中山大学肝脏病医院)
摘要：本发明公开了冬眠动物多能干细胞分化为肝细胞的方法，该方法采用ActivinA和CHIR99021分别激活TGFβ和Wnt信号通路，将多能干细胞诱导分化成内胚层细胞,随后以肝细胞生长因子使其向肝样细胞分化，最后以含制瘤素M及地塞米松的培养液促进其成熟。该方法能够有效缩短多能干细胞分化成肝样细胞的时间，提高诱导分化效率，并能够实现冻存复苏，可持续传代，为研究冬眠模式动物冷适应‑复温、缺氧‑复氧等实验模型中的代谢调控机制提供了工具基础。本发明还提供一种利用上述肝细胞筛选为体外冷保存人体细胞提供保护的代谢产物的方法。
主权项：1.冬眠动物干细胞分化为肝细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：S01、分化前处理：将冬眠动物的多能干细胞消化成单细胞后接种于包被Geltrex胶的培养皿中，置于无菌培养箱中培养；S02、内胚层分化：待分化前处理的培养皿中细胞生长汇合度达到10％～20％，采用第一诱导分化培养基进行培养，1天后采用第二诱导分化培养基进行培养，再过1天后采用第三诱导分化培养基培养1～2天；所述第一诱导分化培养基为添加了ActivinA、CHIR9901、B27的RPMI-1640培养基，所述第二诱导分化培养基为添加了ActivinA、KSR的RPMI-1640培养基，所述第三诱导分化培养基为添加了ActivinA、KSR的RPMI-1640培养基，且第三诱导分化培养基中添加的KSR的浓度高于第二诱导分化培养基中KSR的浓度；S03、肝祖细胞分化：采用第四诱导分化培养基进行培养，所述第四诱导分化培养基为添加了HGF、FBS、谷氨酰胺、非必需氨基酸的AdvancedF12培养基；S04、肝样细胞成熟：采用第五诱导分化培养基进行培养，所述第五诱导分化培养基为添加了OncostatinM、dexamethasone的Lonza培养基，得到成熟肝细胞。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中山大学附属第三医院(中山大学肝脏病医院) 冬眠动物干细胞分化为肝细胞的方法、利用该肝细胞筛选人体外细胞保护的代谢产物的方法
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