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申请/专利权人：新疆农业科学院植物保护研究所

摘要：本发明提供了一种防治瓜列当的活性物质及其提取方法与应用，该提取方法包括以下步骤：1将贝莱斯芽孢杆菌GDMCCNo.60755进行液体发酵，得到发酵液；2使用大孔树脂对发酵液进行提取、减压蒸馏后，得到粗提物；3将粗提物进行硅胶柱层析分离得到活性组分；4将活性组分使用半制备高效液相色谱分离纯化，得到六氢‑3‑[4‑羟基苯基甲基]吡咯并[1,2‑α]吡嗪‑1,4‑二酮和六氢‑7‑羟基‑3‑苯甲基吡咯并[1,2‑α]吡嗪‑1,4‑二酮通过体外活性测试，证实了上述两种化合物具有抑制瓜列当种子萌发的作用，为防治瓜列当提供了一个新的路径。

主权项：1.一种防治瓜列当的活性物质的提取方法，其特征在于，该提取方法包括以下步骤：1将贝莱斯芽孢杆菌GDMCCNo.60755进行液体发酵，得到发酵液；2将发酵液以5％的接种量接种于装有XAD-16大孔树脂和NB培养液的三角瓶中，于28℃、180rmin下振荡培养培养5d；摒弃上述三角瓶中的发酵液，留下大孔树脂并用蒸馏水反复清洗直至干净，28℃下烘干；烘干后的树脂用甲醇浸泡得到甲醇浸提液，反复浸泡3次；收集浸提液进行旋转蒸发减压蒸馏，得到粗提物浸膏；用质量分数为50％的甲醇水溶液将粗提物浸膏再次溶解，用一倍体积的二氯甲烷萃取4次；收集有机相，真空浓缩，得到提取物浸膏，即为所述粗提物；3将上述粗提物用石油醚-乙酸乙酯-甲醇体系进行减压硅胶柱层析，按照极性由小到大的顺序将粗提物分成20个组分，命名为L2-1～20，分别测试L2-1～20对瓜列当种子萌发的抑制活性，发现在石油醚:乙酸乙酯＝3:1作为流动相洗脱得到的组分有抑制活性，命名为L2-11，收集活性洗脱液；对馏分L2-11进行HPLC半制备液相纯化，获得目标化合物L2-11-1和L2-11-2；其中HPLC的条件是：采用Agilent1260型半制备高压液相色谱仪，Kromasil100-5-C18反相半制备色谱柱，所述反相半制备色谱柱的规格为10μm、10x250mm，流速2.0mLmin，用色谱甲醇和水作为流动相，制备条件：40％甲醇水等度洗脱20min，得到活性物质六氢-3-[4-羟基苯基甲基]吡咯并[1,2-α]吡嗪-1,4-二酮，命名为L2-11-1，和六氢-7-羟基-3-苯甲基吡咯并[1,2-α]吡嗪-1,4-二酮，命名为L2-11-2。

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