买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：北京和合医学诊断技术股份有限公司

申请日：2020-08-25

公开（公告）日：2022-11-08

公开（公告）号：CN111929394B

专利技术分类：...制备[2006.01]

专利摘要：本发明提供了华法林的检测方法，包括：制备具有华法林和内标物的至少三种浓度的标准溶液；利用液相色谱质谱联用仪分别检测每一种标准溶液，获得每种标准溶液的第一检测结果；根据各个第一检测结果、标准溶液中的华法林和内标物的浓度拟合华法林的标准曲线方程；对待处理样品进行离心处理，取离心后的第一上清液；向第一上清液内加入沉淀蛋白试剂和内标物，涡旋混合并高速离心，取离心后的第二上清液作为待测样品；利用液相色谱质谱联用仪在检测条件下检测待测样品，获得待测样品的第二检测结果；基于标准曲线方程和第二检测结果，得到待测样品中华法林的浓度。本方案能够缩短样品检测时间。

专利权项：1.华法林的检测方法，其特征在于，包括：制备至少三种浓度的标准溶液，其中，所述标准溶液为具有华法林和内标物的溶液，且所述至少三种浓度的标准溶液中的内标物的量相同；利用液相色谱质谱联用仪在预设的检测条件下分别检测每一种所述标准溶液，获得每一种所述标准溶液对应的第一检测结果；根据各个所述第一检测结果、所述标准溶液中的华法林和内标物的浓度，拟合华法林的标准曲线方程；对待处理样品进行离心处理，取离心后的第一上清液，所述待处理样品的取用量为2-10μL；向所述第一上清液内加入沉淀蛋白试剂和含有内标物的内标工作液，涡旋混合，并高速离心，取离心后的第二上清液作为待测样品；所述沉淀蛋白试剂选自甲醇溶液，所述沉淀蛋白试剂与所述第一上清液的体积比为1:8；利用液相色谱质谱联用仪在所述检测条件下检测所述待测样品，获得所述待测样品的第二检测结果；基于所述标准曲线方程和所述第二检测结果，得到所述待测样品中华法林的浓度；所述内标物为华法林-D5；所述检测条件中的液相条件，包括：色谱柱为WatersAtlantisdC182.1*50mm5μm；AglientExtend-C182.1*50mm5μm；2.1*50mm5μm；AglientXDB-C82.1*50mm5μm；SHIMADZU-SP-C182.1*50mm5μm或Aglient-SB-Aq2.1*50mm5μm；洗脱流动相为有机相和水相，其中，有机相为甲醇溶液；柱温为18℃-50℃；流速为0.2-0.6mLmin；所述洗脱流动相中的有机相与水相的比例为： 所述洗脱流动相中的有机相中含有0-1mmolL的缓冲盐和0-0.5%的甲酸；所述洗脱流动相中的水相中含有0-10mmolL的缓冲盐和0-0.5%的甲酸；所述检测条件中的质谱条件，包括：所述液相色谱质谱联用仪中的质谱检测器为ESI+检测模式；所述液相色谱质谱联用仪中的离子源参数为：加热气流速:8-12Lmin，雾化气流速:30-35Lmin，加热气温度:300-350℃，毛细管电压:3000-4000V；所述检测方法的检测限为0.077ngmL，定量限为0.23ngmL。

百度查询： 北京和合医学诊断技术股份有限公司 华法林的检测方法