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申请/专利权人：司法鉴定科学研究院
摘要：本发明提供了一种基于HRM的多DNA位点联合鉴定古巴光盖伞体系和方法，该体系包括用于鉴别古巴光盖伞的ITS、ITS1和ITS2、RPB1、tEF‑1α、PC‑PT和PC‑13的引物；与目前主要的致幻蘑菇鉴定方法相比，本发明基于HRM分析进行多DNA位点联合鉴定，具有省时、高效、特异性好、稳定性好和易于推广等优点。该方法使用EvaGreenTM染料，降低了染料位置重组的可能，可准确的分析扩增产物中DNA的序列信息，生成特定HRM曲线和Tm值，作为物种特异性的标签。
主权项：1.一种采用古巴光盖伞体系的基于实时荧光PCR和HRM的多DNA位点联合鉴定古巴光盖伞的方法，其特征在于，所述古巴光盖伞体系包括用于鉴别古巴光盖伞的7个DNA位点的引物；所述7个DNA位点包括5个DNA条形码和2个蛋白编码基因，具体包括序列为SEQIDNO.1的ITS、序列为SEQIDNO.4的ITS1和序列为SEQIDNO.6的ITS2、序列为SEQIDNO.8的RPB1、序列为SEQIDNO.17的tEF-1α、序列为SEQIDNO.11的裸盖菇素相关的磷酸转移酶的编码基因和序列为SEQIDNO.14的3-磷酸甘油醛脱氢酶的编码基因；所述方法包括如下步骤：步骤一，提取待测样本DNA；步骤二，利用所述引物对7个DNA位点分别进行实时荧光PCR扩增，得到扩增产物；步骤三，对待测样本DNA的扩增产物进行HRM分析并判断是否为古巴光盖伞；步骤三中判断的标准为：针对所述7个DNA位点，HRM曲线Tm值是否满足以下的全部条件：ITS：83.72±0.11℃，ITS1：80.98±0.16℃，ITS2：83.22±0.13℃，RPB1：87.93±0.12℃，裸盖菇素相关的磷酸转移酶的编码基因：82.20±0.15℃，3-磷酸甘油醛脱氢酶的编码基因：79.73±0.15℃，tEF-1α：80.10±0.25℃；若全部满足上述条件，待测样本是古巴光盖伞；若不满足其中任何一条，则待测样本不是古巴光盖伞。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 司法鉴定科学研究院 一种基于HRM的多DNA位点联合鉴定古巴光盖伞体系和方法
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