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申请/专利权人：康码(上海)生物科技有限公司;康码(上海)海洋科技有限公司
摘要：本发明公开一种基于LAC4基因实现基因编辑筛选的方法，该方法为：步骤1，基因改造：通过基因改造使出发菌株染色体上LAC4基因无法表达正常功能的LAC4蛋白，得到LAC4基因缺陷的菌株，该LAC4基因缺陷的菌株在以乳糖为唯一碳源的培养基上无法正常生长；步骤2，基因恢复：将目标基因与正常的LAC4基因连接构成供体片段，将此供体片段转入前述LAC4基因缺陷的菌株，使LAC4基因恢复正常的表达功能；步骤3，基因恢复后的菌株在以乳糖为唯一碳源的培养基上进行培养，能够正常生长的菌株为LAC4基因恢复的菌株，也是目标基因正常插入的菌株。相比无筛选功能的CRISPRCas9系统，本系统通过筛选可剔除绝大部分基因编辑阴性的菌株，大大提高筛选阳性率，可基本无需PCR筛选，节省时间和成本。
主权项：1.一种基于LAC4基因实现基因编辑筛选的方法，该方法为：步骤1，基因改造：通过gRNA参与的基因改造使乳酸克鲁维酵母出发菌株染色体上的LAC4基因与提供缺陷基因的供体重组，获得无法表达正常功能的LAC4蛋白的LAC4基因缺陷的菌株，所述LAC4基因缺陷的菌株在以乳糖为唯一碳源的培养基上无法正常生长；步骤2，基因恢复：将目标基因与正常的LAC4基因连接构成供体片段，将此供体片段转入前述LAC4基因缺陷的菌株，使LAC4基因恢复正常的表达功能；步骤3，基因恢复后的菌株在以乳糖为唯一碳源的培养基上进行培养，能够正常生长的菌株为LAC4基因恢复的菌株，也是目标基因正常插入的菌株;所述步骤2，基因恢复时，LAC4基因启动子区域作为插入片段而非同源片段进行重组。
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百度查询： 康码(上海)生物科技有限公司 康码(上海)海洋科技有限公司 一种基于LAC4基因实现基因编辑筛选的方法
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