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申请/专利权人：中国药科大学

摘要：本发明公开了一种组氨酸酶及尿刊酸还原酶活性检测方法，包括：对生物样本中组氨酸酶和尿刊酸还原酶进行提取，获得匀浆液；分别构建组氨酸酶孵育体系和尿刊酸还原酶孵育体系，孵育体系37℃水浴孵育；孵育结束后，离心，采用含内标物1‑甲基色氨酸的有机溶剂沉淀蛋白，挥干上清液，得到进样样品；进样样品用50％甲醇复溶，离心，取上清液进样，进行LC‑MSMS分析，基于尿刊酸标准曲线、咪唑丙酸标准曲线获得尿刊酸、咪唑丙酸的浓度，根据尿刊酸、咪唑丙酸浓度分别获得生物样品中组氨酸酶、尿刊酸还原酶活性。本发明能够同时检测组氨酸酶及尿刊酸还原酶代谢产物，实现了对相应产物的定量分析以及组氨酸酶和尿刊酸还原酶活性的同时检测。

主权项：1.一种组氨酸酶及尿刊酸还原酶活性检测方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1、对生物样本中组氨酸酶和尿刊酸还原酶进行提取：将生物样本和超纯水涡旋混匀，再在低温0～4℃静置2h，静置期间每隔30min涡旋1～2min，获得匀浆液；步骤2、分别构建组氨酸酶孵育体系和尿刊酸还原酶孵育体系，组氨酸酶孵育体系设置四个处理组：组氨酸酶实验组、空白溶剂对照组、生物样本空白匀浆组、组氨酸空白溶剂对照组，尿刊酸还原酶孵育体系设置四个处理组：尿刊酸还原酶实验组、空白溶剂对照组、生物样本空白匀浆组、尿刊酸空白溶剂对照组；其中，组氨酸酶实验组为：往匀浆液中加入组氨酸标准品，尿刊酸还原酶实验组为：往匀浆液中加入尿刊酸标准品；组氨酸酶孵育体系和尿刊酸还原酶孵育体系均在37℃水浴中孵育4h，每隔30min涡旋混匀1min；步骤3、孵育结束后，组氨酸酶孵育体系、尿刊酸还原酶孵育体系均进行离心，再采用含内标物1-甲基色氨酸的有机溶剂沉淀蛋白，挥干上清液，得到进样样品；步骤4、进样样品采用50％甲醇复溶，离心，取上清液进样，进行LC-MSMS分析，基于尿刊酸标准曲线、咪唑丙酸标准曲线获得尿刊酸、咪唑丙酸的浓度，根据尿刊酸、咪唑丙酸浓度分别获得生物样品中组氨酸酶、尿刊酸还原酶活性：组氨酸酶酶活性＝实验组尿刊酸浓度-空白溶剂对照组尿刊酸浓度-生物样本空白匀浆组尿刊酸浓度-组氨酸空白溶剂对照组尿刊酸浓度孵育时间；尿刊酸还原酶酶活性＝实验组咪唑丙酸浓度-空白溶剂对照组咪唑丙酸浓度-生物样本空白匀浆组咪唑丙酸浓度-尿刊酸空白溶剂对照组咪唑丙酸浓度孵育时间。

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百度查询： 中国药科大学 一种组氨酸酶及尿刊酸还原酶活性检测方法