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申请/专利权人：浙江诸暨聚源生物技术有限公司

摘要：本发明公开了一种交联重组胶原蛋白防粘连膜中EDAC残留量的检测方法。所述方法选择溶解后几乎无色的木瓜蛋白酶，其价格低廉且基底吸收小，将交联重组胶原蛋白防粘连膜加入木瓜蛋白酶溶液中，使得交联重组胶原蛋白防粘连膜中EDAC更好地释放出来，且木瓜蛋白酶溶液对后续吸光度的检测实验无干扰，提高了检测的准确度。

主权项：1.交联重组胶原蛋白防粘连膜中EDAC残留量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、二甲基巴比妥酸试液的配制：按二甲基巴比妥酸：吡啶：水=1g:16mL:4mL，将二甲基巴比妥酸加入吡啶中，并加水，混匀，配制成二甲基巴比妥酸试液；步骤2、醋酸吡啶溶液的配制：将等体积的冰醋酸和吡啶混匀，配制成醋酸吡啶溶液；步骤3、木瓜蛋白酶溶液的配制：将木瓜蛋白酶溶解于纯化水中，配制成1mgmL的木瓜蛋白酶溶液；步骤4、EDAC对照品储备液的配制：先将EDAC溶解于木瓜蛋白酶溶液中，配制成19.2μgml的EDAC对照品储备液；步骤5、EDAC对照品工作液的制备：取19.2μgmlEDAC对照品储备液，用木瓜蛋白酶溶液分别稀释至1.92μgml、4.8μgml、9.6μgml、19.2μgml，制得EDAC对照品工作液；步骤6、供试品溶液的制备：按交联重组胶原蛋白防粘连膜：木瓜蛋白酶溶液=1g：10ml，将交联重组胶原蛋白防粘连膜加入木瓜蛋白酶溶液中，37℃保温待完全溶解后，离心，取上清液，得到交联重组胶原蛋白防粘连膜样品溶液作为供试品溶液，所述的交联重组胶原蛋白防粘连膜为以EDAC为交联剂交联重组胶原蛋白所形成的防粘连膜；步骤7、吸光度的测定：取供试品溶液和EDAC对照品工作液各0.2ml，分别加入二甲基巴比妥酸试液1.8ml；另取0.2ml木瓜蛋白酶溶液作为空白对照，加入二甲基巴比妥酸试液1.8ml；混匀各管，室温暗处静置30min，然后向各管分别加入醋酸吡啶溶液2.0ml，混匀后在波长599nm处测定吸光度；步骤8、计算结果：以EDAC对照品工作液的浓度对其相应的吸光度作直线回归，求得直线回归方程，将供试品溶液的吸光度代入直线回归方程，根据计算公式：供试品EDAC残留量=供试品溶液EDAC的平均浓度×稀释倍数，计算得到供试品EDAC残留量，即为交联重组胶原蛋白防粘连膜中EDAC残留量。

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