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一种青鳉卵母细胞减数分裂I中期纺锤体的制片方法及应用 

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申请/专利权人:中国科学院水生生物研究所;岭南现代农业科学与技术广东省实验室

摘要:本发明属于细胞遗传学的领域,公开了一种青鳉卵母细胞减数分裂I中期纺锤体制片的方法及应用,申请人通过排尽成熟卵的方法促使青鳉初级卵母细胞发育从而收集包含减数分裂I中期卵母细胞的卵,以及连同内卵膜分离出卵母细胞,从处于减数分裂I中期的青鳉卵中连同内卵膜直接分离卵母细胞。利用该方法可进行青鳉减数分裂I中期纺锤体免疫荧光实验,为开展青鳉减数分裂机制提供了强有力的技术手段。

主权项:1.一种青鳉卵母细胞减数分裂I中期纺锤体的制片方法,包括下述步骤:1)获得青鳉减数分裂I卵母细胞:获取青鳉雌鱼完整卵巢,挑选透明的较大的卵,即获得包含处于减数分裂I中期卵母细胞的卵;所述的青鳉雌鱼为与雄鱼配对繁殖后,排尽成熟卵的,之后在光照时间≥16h条件下单独饲养一天的雌鱼;获取卵巢之前,青鳉雌鱼已死亡;2)获得青鳉减数分裂I中期纺锤体展片:将这些卵整体浸入PFA,于室温放置,再用PBS清洗;加入几丁质酶至0.2-0.5UmL,孵育,再用PBS清洗;将卵卡入凹槽,使卵的植物极朝上;在显微镜下,用尖镊撕开植物极,将内卵膜从卵中取出,并平铺在载玻片上,使卵膜内部朝外摆放,并晾干;3)将纺锤体展片于进行烘烤,再浸入PBST,之后按照常规方式进行荧光标记。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 中国科学院水生生物研究所 岭南现代农业科学与技术广东省实验室 一种青鳉卵母细胞减数分裂I中期纺锤体的制片方法及应用

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