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申请/专利权人：青岛科技大学

摘要：本发明首次利用新型自发光铜基金属有机骨架Cu‑MOF研制了电位型ECL生物传感器，应用于两种BRCA基因的同时检测。自增强电化学发光Cu‑MOF作为a通道正电位ECL信号材料，Au@AgNPs作为猝灭剂；CdTeCdSQDs作为b通道负电位ECL发光材料，采用目标循环放大产出DNA，将猝灭剂Au@AgNPs连接到a通道猝灭Cu‑MOF的ECL信号，同时将发光试剂CdTeCdSQDs连接到b通道，实现零背景ECL信号的增强，完成对BRCA1和BRCA2的同时检测。该发明解决了传统电位分辨型ECL生物传感器需要多种共反应物的限制，为构建ECL生物传感器提供了新思路，在环境监测、食品安全和疾病分析等方面具有很大的应用潜力。

主权项：1.一种基于自增强电化学发光MOF的生物传感器检测BRCA基因的方法，其特征是：利用目标产物引入两种探针，Au@AgNPs猝灭Cu-MOF的正电位ECL信号，CdTeCdSQDs产生负电位ECL信号，构建电位分辨型ECL传感器，根据双电位ECL信号变化，对BRCA1和BRCA2同时检测分析；具体步骤如下：步骤1.Cu-MOF的制备：将11.59mgCuNO32·5H2O、20mgDPA和2.7mgD-H2悬浮在2.5mLDMF中；将混合物转到高压釜中，在120℃下加热48小时；用DMF洗涤三次，60℃真空干燥；步骤2.Au@AgNPs的制备：在烧瓶中加入50毫升去离子水和1毫升1wt％HAuCl4并煮沸；快速加入4mL1wt％柠檬酸钠，搅拌至酒红色得AuNPs；再将1.5mLAuNPs、10.8mL超纯水、0.45mL24mMTollens试剂、0.72mL10mMHCHO溶液混合，室温搅拌15min，得Au@AgNPs在4℃保存备用；步骤3.目标放大：20μL5μMH1、8UExoⅢ和20μL不同浓度BRCA1溶液加到40μLTris-HCl中，于37℃孵育90min，80℃10分钟，制备S1；同理制备产物链S2；步骤4.制备探针:将10μL10μMH4加到90μLAu@AgNPs中搅拌过夜，得Au@AgNPs-H4探针；用0.1M的EDC和0.025MNHS活化CdTeCdS量子点羧基，将10μL10μMH4加到90μL活化CdTeCdSQDs中，37℃反应6h,离心洗涤数次，分散在等体积PBS中；步骤5.ECL传感器制备及检测：将20μL2mg·mL-1Cu-MOF和1％GLD分别加到电极的a、b通道中，自然干燥；加入20μL5μMH3，37℃孵育2h，再加入15μL1mM6-巯基己醇孵育40min；在通道a中加入20μLS1，在通道b中加入20μLS2，在37℃下孵育2h；最后在通道a和b中分别加入20μLH4-Au@AgNPs和H4-CdTeCdSQDs，孵育2h，制备的电极如下条件检测ECL信号；ECL检测溶液为0.1M,pH＝7.4PBS含有50mM过硫酸钾；采用三电极体系：铂丝电极为对电极，AgAgCl电极为参比电极，ITO电极为工作电极；ECL信号从-1.4V到1.5V记录下来，光电倍增管为-750V。

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百度查询： 青岛科技大学 一种基于自增强电化学发光MOF的生物传感器检测BRCA基因的方法