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申请/专利权人：广州普世利华科技有限公司

摘要：本发明公开一种快速检测乙型流感病毒的RDA方法及试剂盒，包括特异性引物对以及RDA荧光标记探针，以实现对乙型流感病毒（FluB）进行安全、特异、灵敏、简便的检测，从而弥补现有传统检测技术的不足。此方法提供的试剂盒可省去核酸提取步骤，并在37～42℃恒温条件下、20min内实现乙型流感病毒的检测，特异性为100％，非常适用于现场快速检测。与普通PCR方法相比，RDA荧光法是在恒温下反应，不需变温，不需复杂仪器，而且反应时间短。因此，本发明的方法及其试剂盒具有操作简单、快速、特异性好、灵敏度高、成本低廉等特点，为乙型流感病毒的现场快速检测筛查提供有效的技术手段，具有广阔的应用前景。

主权项：1.一种非疾病诊断目的检测乙型流感病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括核酸提取试剂、恒温扩增反应模块、阳性对照、阴性对照、探针及引物对；所述探针核苷酸序列如SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示；所述核苷酸序列为SEQIDNO.1的探针，其5’端标记发光基团，3’端标记淬灭基团，第5-10位碱基中任一位置用四氢呋喃残基THF替代；所述核苷酸序列为SEQIDNO.2的探针，其5’端起第40位碱基T标记发光基团，第43位碱基用四氢呋喃残基THF替代，第45位碱基标记淬灭基团，3’端进行C3-spacer阻断修饰；所述引物对核苷酸序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示；所述恒温扩增反应模块包括氨基酸序列如SEQIDNO.7所示的重组酶KX蛋白和氨基酸序列如SEQIDNO.9所示的KY蛋白；所述的恒温扩增反应模块为RDA恒温扩增反应混合试剂的冻干粉试剂；所述的RDA恒温扩增反应混合试剂的冻干粉试剂包括重组酶KX60-600ngμL、KY蛋白16-192ngμL、单链结合蛋白gp32100-1000ngμL、链置换DNA聚合酶3-100ngμL、核酸外切酶30～200U、肌酸激酶0.1-0.8mgml、磷酸肌酸25-75mM、反转录酶200U、Tris缓冲液20～100mM、PEG2.5％-10％、醋酸钾或醋酸钠0-150mM、dATP1-5mM、dNTPs150-600nM、DTT1-12mM、所述探针150nM-600nM、所述引物对150-600nM。

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