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申请/专利权人:广西壮族自治区食品药品检验所
摘要:本发明涉及致病菌鉴定技术领域,具体涉及一种乳酶生片生产菌种的分子鉴定方法。本发明提供的一种乳酶生片生产菌种的分子鉴定方法,包括一对扩增引物的设计合成;通过DNA提取、PCR扩增、酶切反应以及产物鉴定。本发明所提供的一种乳酶生片生产菌种的分子鉴定方法,仅编号为140623CMCCB32901乳酶生片生产菌种的基因组PCR产物能被BglII内切酶切开,其余菌种均无法被切开,具有很强的专属性和准确性。
主权项:1.一种乳酶生片生产菌种的分子鉴定方法,其特征在于,包括如下步骤:S1:扩增引物的设计合成;S2:DNA的提取:提取乳酶生片生产菌种的基因组DNA;S3:PCR扩增:将S2提取得到的菌株DNA,按照PCR扩增反应总体系为25μL,PCRMasterMix12.5μL、扩增引物的上游引物10μM1.0μL、扩增引物的下游引物10μM1.0μL、DNA模板50.0μg,补足ddH2O至25μL,进行PCR扩增反应;S4:酶切反应:以S3所得到的PCR扩增产物为模板,进行酶切反应;酶切反应总体系为3.0μL,其中PCR产物2.0μL、BglII内切酶0.5μL、r3.1buffer0.3μL、补足ddH2O至3.0μL;S5:产物鉴定:PCR产物及酶切产物经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。
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