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摘要:本发明公开了一种黄豆杉种胚快繁体系的建立方法,包括1)将处理消毒后的黄豆杉种子置于显微镜下剥离种皮与胚乳,取出种胚接种于DCR培养基中,于25±2℃温度条件下,16h光照和8h黑暗交替进行或采用黑暗过渡培养,培养至黄豆杉幼苗长至第一对真叶完全展开时,转移至16h光照和8h黑暗交替培养。幼苗高度>2cm时,将幼苗转移至生根培养基中进行生根诱导;2)选取生长健硕的黄豆杉无菌幼苗进行驯化移栽,后正常养护。本发明方法可有效提高黄豆杉种子的萌发率,且生长势较均一,解决种子休眠时间长的问题,使胚在1‑2个月内形成正常幼苗,为黄豆杉快速繁殖奠定理论基础,也为研究黄豆杉中紫杉醇生物合成提供了良好的培养系统。
主权项:1.黄豆杉种胚快繁体系的建立方法,其特征在于,该建立方法包括以下步骤:1)将黄豆杉种子剥去肉质假种皮后置于烧杯中,浓硫酸预处理种皮后流水冲洗,后置于超净工作台中消毒,置于显微镜下剥离种皮与胚乳,取出种胚接种于DCR培养基中培养,培养条件:25±2℃温度条件下,采用黑暗过渡培养,培养至黄豆杉幼苗长至第一对真叶完全展开时,转移至16h光照和8h黑暗交替培养,待黄豆杉幼苗高度>2cm时,将黄豆杉幼苗转移至生根培养基中进行生根诱导;2)选取生长健硕的黄豆杉无菌幼苗进行驯化移栽,后进行正常养护;所述DCR培养基由1.0mgLBA、0.5mgLKT、3.0mgLGA3、2.0gLAC、2.5%蔗糖、0.36%Gelrite组成,DCR培养基的pH为5.7;步骤2)驯化移载的具体过程为:6-1)选取生长健硕,根系发达的黄豆杉无菌苗,先在驯化室打开封口膜放置3-5天;6-2)栽培土配制:蛭石:珍珠岩:泥炭按质量比1:1:1的比例混合后,装入8cm*8cm营养盒中备用;6-3)取出黄豆杉无菌苗用清水将培养基清洗干净,后用含有多菌灵的清水浸泡3min后,栽入营养盒,浇水后,外罩塑料袋以保湿;6-4)置于驯化室中培养,前一周注意水分管理,后去除塑料袋进行正常养护,培养2个月后观察新根生长情况。
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