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申请/专利权人：深圳蓝晶生物科技有限公司
摘要：本发明涉及提高哺乳动物表达系统中作为载体的VSV病毒样颗粒产量的方法。所述方法包括将包含如下序列的质粒转染至哺乳动物宿主细胞：a加帽酶‑RNA聚合酶表达盒，所述加帽酶‑RNA聚合酶表达盒包含第一启动子序列以及嵌合型加帽酶‑RNA聚合酶编码序列；b病毒封装辅助蛋白表达盒，所述病毒封装辅助蛋白表达盒包含各病毒封装辅助蛋白的编码序列以及驱动所述病毒封装辅助蛋白表达的第二启动子；c目的基因表达片段。本发明还涉及提高哺乳动物表达系统中作为载体的VSV病毒样颗粒产量的系统，以及上述方法和系统在制备基因表达载体或RNA疫苗方面的用途。
主权项：1.一种提高哺乳动物表达系统中病毒样颗粒产量的方法，其特征在于，所述病毒样颗粒为作为载体的水疱性口炎病毒病毒样颗粒；所述方法包括将包含如下序列的质粒转染至哺乳动物宿主细胞：a加帽酶-RNA聚合酶表达盒，所述加帽酶-RNA聚合酶表达盒包含第一启动子序列以及嵌合型加帽酶-RNA聚合酶编码序列，其中，所述嵌合型加帽酶-RNA聚合酶包含单体RNA聚合酶结构域以及病毒加帽酶结构域；所述单体RNA聚合酶选自于由T7RNA聚合酶、T3RNA聚合酶、K1.5RNA聚合酶、K1ERNA聚合酶、K11RNA聚合酶、SP6RNA聚合酶以及Phi15RNA聚合酶所组成的组；所述病毒加帽酶选自于由蓝舌病毒加帽酶、非洲猪瘟病毒加帽酶、棘阿米巴多噬拟态病毒加帽酶、竹花叶病毒加帽酶以及痘苗病毒加帽酶所组成的组；b病毒封装辅助蛋白表达盒，所述病毒封装辅助蛋白表达盒包含各病毒封装辅助蛋白的编码序列以及驱动各病毒封装辅助蛋白表达的第二启动子，其中，所述病毒封装辅助蛋白为水疱性口炎病毒的G蛋白、N蛋白、P蛋白以及L蛋白；所述各第二启动子独立地为所述单体RNA聚合酶识别的启动子；c目的基因表达片段，所述目的基因表达片段为所述G蛋白编码序列被所述目的基因序列替换的水疱性口炎病毒基因组cDNA；其中，所述目的基因表达片段的5’端具有第三启动子，所述第三启动子为所述单体RNA聚合酶识别的启动子。
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