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申请/专利权人：福建农林大学

摘要：本发明公开了一种日本落叶松子叶为外植体诱导不定芽并获得再生植株的方法，其包括播种、消毒、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽的步骤。本发明利用含有不同激素配比的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，使得日本落叶松分化效率高、增殖系数高、生根率高，植物生长需求时间短，栽培后适应性强，苗木健壮挺拔，长势良好，整齐一致，大大缩短了苗木培养过程，节约了大量成本。本发明建立了由日本落叶松子叶为起始的不定芽诱导体系，并成功获得再生植株，为日本落叶松苗的快繁提供了一种技术手段，也为将来的高效的日本落叶松转基因体系建立提供平台。

主权项：1.一种以日本落叶松子叶为外植体的高效再生方法，其特征在于：包括如下步骤：1）播种：选取成熟饱满的种子，用自来水浸泡24h后于播种于基质中，种子萌发15~20天后，选取生长健壮的幼苗作为下一步实验的材料；2）消毒：将步骤1）得到的幼苗用自来水清洗干净，去根后依次用75vol%酒精浸泡30~60s、0.1vol%升汞溶液浸泡5~7min、无菌水冲洗5次；3）诱导培养：将步骤2）消毒后的幼苗取子叶切段作为外植体，接种到诱导培养基上培养30天，获得不定芽；所述诱导培养基的配方为：DCR培养基+1.5mgL6-BA+0.001mgLTDZ；4）增殖培养：将步骤3）培养得到的不定芽经切割后转接到增殖培养基上培养60天，获得不定芽丛；所述增殖培养基的配方为：DCR培养基+1.5mgL6-BA+0.001mgLTDZ+0.2gL活性炭；5）生根培养：将步骤4）培养得到的不定芽丛接种到生根培养基上培养30~60天，获得生根苗；所述生根培养基的配方为：DCR培养基+0.05mgLNAA+0.2gL活性炭；6）炼苗：将步骤5）培养得到的生根苗转到炼苗室进行炼苗；7）移栽：在炼苗10天后，将生根苗移栽于基质中，温室培养1~2周，随后进行遮荫散光培养；所述基质是将营养土、蛭石和珍珠岩按体积比2：2：1混合制得；所述诱导培养、增殖培养、生根培养的条件均为：光照速率80μmol·m-2·s-1、光照时间16hd、室温25±2℃；所述步骤6）具体为：将步骤5）培养得到的生根苗放入自来水中呈半开瓶状态炼苗，炼苗室温度为25℃、光照时间为16hd、光照强度80μmol·m-2·s-1、湿度为65%；所述步骤7）具体为：在炼苗10天后，待根系由白色转变成灰白色时，将生根苗进行移栽，移栽时先将生根苗于清水中漂洗以去除根部的培养基，然后晾干根系的表面水分，再将生根苗移栽入装有基质的容器中，温室培养1~2周，温室培养条件为：光照时间16hd、光照强度2000lux、温度21~26℃，随后进行遮荫散光培养，每天喷水，湿度保持在40%~60%。

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