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申请/专利权人:西北农林科技大学
摘要:本发明涉及分子生物技术领域,具体公开了一种苹果黄蚜钠离子通道L1014F突变位点的LAMP检测引物及方法,所述引物包括正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP和环状引物LooPB。本发明提供的检测苹果黄蚜钠离子通道L1014F突变位点的方法,灵敏度高、检测范围大,结果准确可靠,扩增效果好,检测结果准确可靠,适用于苹果黄蚜的快速检测。
主权项:1.一种检测苹果黄蚜钠离子通道L1014F突变位点的方法,其特征在于,包括如下步骤:S1,提取苹果黄蚜基因组DNA;S2,以S1提取的基因组DNA为模板,以正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP和环状引物LooPB为检测引物进行PCR扩增;所述正向外引物F3的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示;所述反向外引物B3的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示;所述正向内引物FIP的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示;所述反向内引物BIP的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示;所述环状引物LooPB的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示;PCR扩增体系为:外引物F3和B3各10μM、内引物FIP和BIP各40μM,内外引物混合一共加入7μL,外引物F3、B3与内引物FIP、BIP的体积比为8∶1,外引物F3与外引物B3、内引物FIP与内引物BIP的体积比均为1∶1,10×LAMPPCR等温扩增反应混合液2.5μL,8UBst聚合酶1μL,DNA模板1.0μL,2μL250μMHNB显色剂;扩增反应的反应条件为:65℃反应70min;S3,结果判断:利用荧光染料显色法将S2的扩增产物中加入染料,放在白纸上进行颜色观察,试管出现蓝色,电泳出现梯形条带,表明存在钠离子通道位点突变,若反应体系变为紫色,无条带扩增,表明待测样品中无钠离子通道L1014F突变。
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