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申请/专利权人：天津大学

摘要：本发明公开了利用甘油合成乙偶姻和生物电的希瓦氏菌菌株及构建方法，方法：连接基因成片段glpF‑glpK‑glpD‑tpiA，并连接在载体PYYDT上，导入希瓦氏菌MR‑1中，得到菌株MR‑KR；将alsS和alsD基因连接在载体PHG13‑Ptet上得到载体PHG13‑Ptet‑alsS‑alsD，导入菌株MR‑KR中，得到菌株KR‑PHG13‑Ptet；将serC和serB基因连接在载体PHG13‑Ptet‑alsS‑alsD上并导入MR‑KR中，得到菌株KR‑serC‑serB。本发明的菌株实现了希瓦氏菌厌氧条件下利用甘油联产乙偶姻和生物电且乙偶姻合成量达到希瓦氏菌中厌氧合成的高产量。

主权项：1.利用甘油合成乙偶姻和生物电的希瓦氏菌菌株构建方法，其特征是包括如下步骤（1）将来源于大肠杆菌（Escherichiacoil）K12MG1655编码甘油转运蛋白的glpF基因、经过密码子优化的来源于肺炎克雷伯氏菌（Klebsiellapneumoniae）MGH78578编码甘油激酶的glpK基因和编码甘油-3-磷酸脱氢酶的glpD基因以及来源于大肠杆菌（Escherichiacoil）K12MG1655编码三磷酸异构酶的tpiA基因连接成片段glpF-glpK-glpD-tpiA，并连接在载体PYYDT上，得到质粒PYYDT-glpF-glpK-glpD-tpiA；（2）将质粒PYYDT-glpF-glpK-glpD-tpiA导入希瓦氏菌MR-1中，得到甘油利用菌株MR-KR；（3）将来源于枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）168编码α-乙酰乳酸合成酶的alsS基因和编码α-乙酰乳酸脱羧酶的alsD基因融合，并连接在载体PHG13-Ptet上，得到质粒PHG13-Ptet-alsS-alsD；（4）将质粒PHG13-Ptet-alsS-alsD导入甘油利用菌株MR-KR中，得到利用甘油合成乙偶姻和生物电的希瓦氏菌菌株KR-PHG13-Ptet；所述glpF基因的核酸序列如SEQIDNO.1所示；所述glpK基因的核酸序列如SEQIDNO.2所示；所述glpD基因的核酸序列如SEQIDNO.3所示；所述tpiA基因的核酸序列如SEQIDNO.4所示；所述载体PYYDT的核酸序列如SEQIDNO.5所示；所述alsS基因的核酸序列如SEQIDNO.6所示；所述alsD基因的核酸序列如SEQIDNO.7所示；所述载体PHG13-Ptet的核酸序列如SEQIDNO.8所示。

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