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申请/专利权人：保罗·谢勒学院

摘要：本发明提供了用于确定G蛋白偶联受体以下称为“GPCR”与可突变配体之结合能力的方法，所述方法包括以下步骤：a提供具有以具有第一数目的行和第二数目的列之阵列设置的孔的孔微量滴定板；b向每个所述孔提供GPCR，例如视紫红质；c提供亲本配体的多个突变体，其中所述亲本配体是当GPCR处于特定构象时与所述GPCR结合的配体；d在亲本配体会与GPCR偶联的条件下使孔中亲本配体的突变体与GPCR接触；以及e对于每一个突变体，通过测定所述孔中偶联的突变体‑GPCR复合物的量来确定，跟所述亲本配体与所述GPCR的标准结合能力相比，该突变配体具有更弱结合能力还是具有更强结合能力。在测定中，研究了覆盖完整视紫红质抑制蛋白序列的403个突变体与视紫红质的结合。该信息提供了无活性视紫红质抑制蛋白、预活化的视紫红质抑制蛋白和活性视紫红质抑制蛋白之晶体结构的功能性第四维度。所得单氨基酸分辨率功能图揭示了在视紫红质抑制蛋白活化期间被破坏的在极性核中并且沿着视紫红质抑制蛋白的C尾的一系列关键相互作用。我们的数据还揭示了强烈降低结合并充当与视紫红质的直接结合界面的若干氨基酸片。该信息与活性视紫红质抑制蛋白4和光活化视紫红质之计算机分子对接的组合允许开发视紫红质抑制蛋白‑视紫红质复合物模型。突变体的组合允许改变GPCR‑配体复合物的结合亲和力和稳定性以用于诊断目的或药理学介入。

主权项：1.突变配体和GPCR对，其中所述对的结合稳定性高于由亲本配体和所述GPCR组成的对，其中所述亲本配体是登录号为P08168的牛视紫红质抑制蛋白1，并且所述突变配体是基于登录号P08168的双重突变体、三重突变体或四重突变体，其中所述双重突变体具有选自T304A+F375A和A307G+F375A的突变；所述三重突变体具有选自D303A+T304A+F375A、E341A+T304A+F375A、F380A+T304A+F375A、R382A+T304A+F375A、F380A+A307G+F375A和R382A+A307G+F375A的突变；并且所述四重突变体具有选自R171A+E341A+T304A+F375A、D303A+E341A+T304A+F375A、R171A+F380A+T304A+F375A和D303A+F380A+T304A+F375A的突变。

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百度查询： 保罗·谢勒学院 用于以单氨基酸分辨率确定可突变配体-GPCR结合的方法以及突变配体和GPCR对