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申请/专利权人：暨南大学

摘要：本发明属于生物医药技术领域，公开了一种TRPV4作为药物靶点在冠状病毒感染抗炎药物中的应用，将细胞经过病毒感染，药物处理或事先基因敲除后，提取细胞中的RNA并反转录得到cDNA，最后Q‑PCR检测细胞因子、趋化因子mRNA表达水平，收取的上清液感染L2进行空斑测定。同时，使用免疫共沉淀以及LCMS技术寻找相互作用蛋白并进行验证。结果显示TRPV4抑制剂显著降低巨噬细胞在冠状病毒感染后各类细胞因子和趋化因子的上升，TRPV4基因缺失也显著抑制细胞因子及趋化因子的表达，表明TRPV4参与调控巨噬细胞对冠状病毒的炎症应答。结果分子靶点清晰，表明TRPV4作为药物靶点在开发冠状病毒抗炎药物应用于临床的前景。

主权项：1.一种TRPV4作为药物靶点在筛选和鉴定冠状病毒感染抗炎药物中的应用；通过筛选和鉴定TRPV4特异性抑制剂，然后在Raw264.7、野生型小鼠BMDM和TRPV4缺失小鼠BMDM中验证其抗炎和抗冠状病毒感染的效果，再通过鉴定TRPV4的相互作用蛋白来进一步了解其机制，并通过测定抑制剂处理和TRPV4基因缺失后的冠状病毒粒子释放量，来评估其临床应用潜力；步骤一，通过离子通道抑制剂药物库筛选出TRPV4抑制剂，鉴定出TRPV4特异性抑制剂HC-067047显示出较高的炎症因子抑制率，证明TRPV4作为临床治疗冠状病毒感染的潜在靶点；步骤二，Raw264.7感染MHV-A59并用HC-067047处理后，提取RNA并反转录为cDNA，通过Q-PCR分析细胞因子、趋化因子mRNA表达水平；步骤三，野生型小鼠BMDM感染MHV-A59并用HC-067047处理后，提取RNA并反转录为cDNA，通过Q-PCR分析细胞因子、趋化因子mRNA表达水平；步骤四，野生型（WT）与TRPV4敲除小鼠BMDM感染MHV-A59后，提取RNA并反转录从cDNA，通过Q-PCR分析细胞因子、趋化因子以及表面标志物CD86的mRNA水平；步骤五，在小鼠BMDM中免疫沉淀TRPV4，SDS-PAGE后，切胶进行LC-MS分析与TRPV4相互作用的目的蛋白，并进行再次鉴定以确定相互作用，依据此蛋白特性进行相应的功能分析；步骤六，收集步骤二、三经HC-067047处理后的上清以及步骤四BMDM感染病毒后的上清，通过空斑测定病毒含量确定病毒复制差异。

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权利要求：

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