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申请/专利权人：河北大学
摘要：本发明提供了一种免样品处理的hmC的定量分析方法。本发明首先将含有hmC的目标链与其互补链杂交成为目标双链，然后根据目标链DNA序列设计了连接探针1和连接探针2，连接探针1的3′端的模板识别区和连接探针2的5′端的模板识别区与模板序列上含有待测位点的部分DNA序列互补杂交，当模板序列上待测位点为hmC时，连接探针1和连接探针2可以通过特定的连接酶连接成为一个长链DNA；在此基础上，以上述连接产物作为模板进行聚合酶链式反应或环介导的恒温扩增反应时，能够得到很明显的实时荧光曲线，进而可根据预先测定的标准曲线图来定量实际样品中hmC的含量。本发明无需样品处理，灵敏度高、特异性好，时间和金钱成本也较低。
主权项：1.一种免样品处理的hmC的定量分析方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将含有hmC的目标链与其互补链杂交成为目标双链；（2）根据目标链DNA序列，设计连接探针1和连接探针2，所述连接探针1从5′端到3′端依次为PCR扩增引物区、无关区、模板识别区，其3′端最末一个碱基是识别碱基A，该碱基与模板序列上的待测位点碱基相对；所述连接探针2从3′端到5′端依次为PCR扩增引物区、无关区、模板识别区；所述连接探针1和连接探针2的模板识别区是与含有待测位点的DNA序列互补的8～20个碱基序列；所述待测位点碱基为hmC、mC或C；（3）将连接探针1和连接探针2与目标双链杂交，然后加入连接酶进行连接反应；（4）以步骤（3）的连接产物为模板进行聚合酶链式反应或环介导的恒温扩增反应，并加入SYBRGreenI荧光染料，实时检测荧光信号，根据预先测定的实时荧光标准曲线确定目标链hmC的含量。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 河北大学 一种免样品处理的hmC的定量分析方法
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