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申请/专利权人：杭州师范大学;山东省中医药研究院
摘要：本发明提供了一种通过特异性切刻酶Nt.BstNBI酶切PCR产物制备单链DNA的方法，属于分子生物学技术领域。本发明根据Nt.BstNBI特异性切刻酶的酶切位点设计多段重复的DNA序列，DNA序列的两端包含正反向引物的结合序列用于PCR扩增，其中一条引物的5’端进行生物素标记，用于后续的实验。Nt.BstNBI特异性切刻酶识别PCR产物上的切刻位点，将重复序列切刻成2个短片段，短片段的解链温度均低于反应温度，可以从主链中脱落下来，以此PCR产物生成生物素标记的ssDNA。本发明提供的单链DNA制备方法可在常规实验室以简单、有效、便捷的方式获得单链DNA，避免序列多样性，大大提高了纯度和效率。
主权项：1.一种通过特异性切刻酶Nt.BstNBI酶切PCR产物制备单链DNA的方法，其特征在于，包含如下步骤：1质粒DNA的制备和提取：以序列I的DNA序列为模板，设计合成一种长度为293nt的含有SMA-FR*引物结合序列和多段重复的Nt.BstNBI特异性切刻酶酶切位点序列的特殊DNA序列，将合成的DNA序列装载至质粒；所述序列I的DNA序列如SEQIDNO.1所示；2聚合酶链式反应扩增目的基因片段：利用SMA-FR*引物对，对步骤1所述质粒进行PCR反应，扩增序列I，得到PCR反应体系；3特异性内切酶酶切获得DNA单链：对步骤2扩增得到的序列I的PCR反应体系进行Nt.BstNBI特异性切刻酶酶切，得到单链DNA。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 杭州师范大学 山东省中医药研究院 一种通过特异性切刻酶Nt.BstNBI酶切PCR产物制备单链DNA的方法
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